livin反義寡核苷酸對(duì)肺腺癌a549細(xì)胞增殖的影響

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1、Livin反義寡核苷酸對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞增殖的影響作者：宋萍鄭金旭管淑紅,邵啟祥李堅(jiān)【摘要】目的：探討Livin基因反義寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotides,ASODN)對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞增殖的影響。方法：用陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)LivinASODN轉(zhuǎn)染至A549細(xì)胞，反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RTPCR)檢測(cè)Livin基因mRNA的表達(dá);MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制情況。結(jié)果：轉(zhuǎn)染ASODN后A549細(xì)胞的Livin基因mRNA的表達(dá)明顯減少，Livin基因ASODN顯著抑制

2、A549細(xì)胞增殖，并呈劑量依賴性，與對(duì)照的錯(cuò)義寡核苷酸(missenseoligodeoxynucleotides,MSODN)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：Livin反義寡核苷酸能明顯抑制A549細(xì)胞Livin基因mRNA的表達(dá)，抑制細(xì)胞增殖，Livin基因有望成為肺癌基因治療的新靶點(diǎn)。【關(guān)鍵詞】肺癌;反義寡核苷酸;Livin　　[Abstract]Objective:Toexploretheeffectsantisenseoligodeoxynucleotides(ASODN)ofL

3、ivinmRNAontheproliferationofhumanlungadenocarcinomaA549cells.Methods:LivinASODNwastransfectedintoA549cellsmediatedbylipofectamine2000.TheexpressionsofLivinmRNAwasdetectedbyRTPCR.The10proliferationratesofA549cellswereassessedbytheMTTassay.Results:Itwasobse

4、rvedthattheexpressionsofLivinmRNAinASODNgroupweredecreasedinaconcentrationdependentmanner.ThecellgrowthinhibitionwasevidentlyincreasedintheASODNtransfectedcells.ThedifferencewassignificantcomparedwithcellsinLivinmissenseoligodeoxynucleotides(MSODN)(P<0.

5、05).Conclusion:LivinASODNsignificantlydownregulatedtheexpressionofLivinmRNAandincreasedgrowthinhibitioninA549cells.ThereforeLivingenemaybecomeanewmoleculartargetforgenetherapyforlungcancer.　　[Keywords]lungcancer;antisenseoligodeoxynucleotides;Livin　　肺癌是世界上

6、最常見的惡性腫瘤之一，由于肺癌早期無典型特異癥狀,初診時(shí)大多數(shù)患者已屬于局部晚期或發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，全身化療是此類患者治療的主要手段，但是肺癌尤其是非小細(xì)胞肺癌的化療效果多不理想，靶向治療為提高肺癌療效提供了的一條頗具希望的新途徑。Livin是凋亡抑制蛋白家族中的一個(gè)重要成員，在多數(shù)惡性腫瘤組織中表達(dá)增高。本研究旨在通過Livin反義寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotides,10ASODN)轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞，觀察對(duì)肺腺癌細(xì)胞A549增殖的影響，探討Livin作為肺癌新靶點(diǎn)治療的可能

7、性?！　?材料與方法　　1.1主要試劑　　DMEM培養(yǎng)基(Gibco公司);小牛血清(甘肅蘭州民海生物科技有限公司);噻唑藍(lán)，二甲亞砜(Amresco公司);LipofectamineTM2000，Trizol(Invitrogen公司);ReverAid試劑盒(Mbi公司);ExTaq酶為TaKaRa公司產(chǎn)品;人肺癌細(xì)胞A549由江蘇大學(xué)生命科學(xué)院提供?！　?.2方法　　1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)A549細(xì)胞選用含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)液中，置于37℃，5%CO2的飽和濕度恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)?！　?.2.

8、2寡核苷酸的設(shè)計(jì)與合成ASODN及錯(cuò)義寡核苷酸(missenseoligodeoxynucleotides,MSODN)序列參照文獻(xiàn)[1]，由上海生工生物工程有限公司合成，并對(duì)寡核苷酸進(jìn)行硫代磷酸化修飾，以提高其血清穩(wěn)定性。反義序列為5′ACCATCACCGGCTGCCCAGT3′;錯(cuò)義序列為5′GTCAGGATCTTCCCACGGAG3′。10　　1.2.3細(xì)胞轉(zhuǎn)染及分組當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后，0.2