大蒜多糖b對小鼠免疫性肝損傷的干預(yù)作用

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1、大蒜多糖B對小鼠免疫性肝損傷的干預(yù)作用作者：孔祥槐，鄭敏，張明霞，王雪靜【摘要】　　目的觀察大蒜多糖B對小鼠免疫性肝損傷的影響。方法采用尾靜脈注射卡介苗（BCG）加脂多糖（LPS）誘發(fā)小鼠免疫性肝損傷。生化方法測定血清及肝組織ALT、AST及血清NO。顯微鏡觀察肝組織病理結(jié)構(gòu)變化。計算各組動物脾臟及胸腺質(zhì)量體質(zhì)量比值。結(jié)果模型組脾質(zhì)量體質(zhì)量比值、血清ALT、AST及NO活性顯著升高（P<0.01），肝組織ALT及AST活性顯著下降，肝細(xì)胞廣泛水腫，呈氣球樣變，血管周圍有炎性細(xì)胞浸潤。大蒜多糖B（600mg/kg.d,ig×12）治療能使BCG+LPS免疫性肝損傷小鼠脾質(zhì)量體質(zhì)量比值下降（

2、P<0.01），血清ALT、NO、AST活性較模型組顯著降低（P<0.01）但仍高于正常對照組（P<0.01）;肝組織ALT、AST較模型組顯著增高（P<0.01）但低于正常對照組（P<0.01）；肝細(xì)胞有輕度水腫及疏松化，肝竇變窄，但病變程度較模型組明顯減輕。結(jié)論大蒜多糖B可抑制機(jī)體免疫活性對小鼠免疫性肝損傷具有一定的保護(hù)作用。【關(guān)鍵詞】免疫;肝損傷；大蒜多糖B8　　研究表明，病毒性肝炎的形成與機(jī)體的免疫應(yīng)答密切相關(guān)［1］，卡介苗+脂多糖(BCG+LPS)誘導(dǎo)的免疫性肝損傷為病毒性肝炎發(fā)病機(jī)制及藥物防治研究的有效實驗?zāi)Ｐ停?～4］。從傳統(tǒng)中藥和食物中尋找有效的護(hù)

3、肝成分已成為病毒性肝炎防治研究的趨勢。大蒜藥食同源，我們從大蒜球根中提取分離出新的安全低毒有效成分大蒜多糖A、B、C，并證實三者對四氯化碳所致小鼠化學(xué)性肝損傷具有保護(hù)作用［5］；除A外，B及C在體外還有抗乙型肝炎病毒作用［6］；大蒜多糖C對BCG+LPS誘導(dǎo)的免疫性肝損傷小鼠肝功能具有保護(hù)性作用［3］并與其抑制過度激活的體液免疫及細(xì)胞免疫功能有關(guān)［7］，大蒜多糖B則尚未進(jìn)行研究。為此，本研究則進(jìn)一步觀察大蒜多糖B對小鼠BCG+LPS免疫性肝損傷小鼠有無保護(hù)作用，為其作為有效的抗病毒性肝炎藥物提供實驗及理論依據(jù)?！　?材料　　1.1動物健康雄性昆明小鼠，體質(zhì)量22～25g，由湖北省醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供

4、，飼養(yǎng)適應(yīng)1周后開始實驗?！　?.2藥品、試劑及儀器大蒜多糖B按照文獻(xiàn)［5］方法提取。凍干卡介苗制（BCG）：蘭州生物制品研究所，批號為20020501，以滅菌生理鹽水配制成10g/L的溶液備用。脂多糖（LPS）：SIGMA公司。AST試劑盒：美國RANDOX公司產(chǎn)品，批號為3611H。ALT試劑盒：浙江東歐生物工程有限公司產(chǎn)品，批號為2002060668。NO試劑盒及蛋白定量試劑盒為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。其余試劑為國產(chǎn)分析純。主要儀器：日本東芝TBA-40FR全自動生化分析儀，HIACHIU-2010紫外分光光度計，醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)（BI2000型,成都泰盟科技有限公司），Olympu

5、sBX40系統(tǒng)生物顯微鏡?！　?方法　　2.1動物模型、分組、標(biāo)本采集及制備小鼠免疫性肝損傷模型采用卡介苗（BCG）加脂多糖（LPS）誘發(fā)即小鼠先尾靜脈注射1%BCG活菌2mg/只致敏，12d后再尾靜脈注射微量LPS（4μg/只）誘導(dǎo)肝損傷。小鼠隨機(jī)分為正常對照組、免疫性肝損傷模型組、大蒜多糖B組［600mg/（kg·d），ig×12］，每組20只。實驗第1天，模型組及大蒜多糖B治療組每只小鼠尾靜脈注射1%BCG溶液2mg即0.2ml，正常對照組尾靜脈注射滅菌生理鹽水(0.2ml/只)。次日起，正常對照組和模型組ig生理鹽水qd×12；大蒜多糖B組ig600mg/kg,qd×12。實驗第12天

6、，模型組、大蒜多糖B組每只小鼠尾靜脈注射LPS4μg，正常對照組給予等容積無菌生理鹽水。12h后，小鼠稱重后摘眼球取血，收集血清備用；同時立即剖腹取同一葉肝組織，以冰生理鹽水洗凈，切取部分放入4%多聚甲醛中固定，部分置于-86℃冰箱中凍存?zhèn)錅y；取胸腺及脾臟稱重，計算胸腺及脾臟質(zhì)量體質(zhì)量比?！　?.28指標(biāo)測定及觀察蛋白定量采用考馬斯亮藍(lán)法，小鼠血清及肝組織ALT和AST活性采用速率法以全自動生化分析儀測定，具體操作按說明書步驟進(jìn)行。NO含量測定采用酶法,按試劑盒說明書進(jìn)行。肝組織固定標(biāo)本按常規(guī)方法制作石蠟切片及HE染色，光鏡觀察組織結(jié)構(gòu)變化并顯微拍照?！　?.3統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS13.0軟

7、件進(jìn)行統(tǒng)計分析。所有數(shù)據(jù)以±s表示.多組間均數(shù)比較采用one-wayanalysisofvariance(ANOVA)及FisherLSDtest(Least-significantdifference)分析,P＜0.05具有統(tǒng)計學(xué)差異?！　?結(jié)果　　3.1大蒜多糖B對免疫性肝損傷小鼠脾及胸腺質(zhì)量體質(zhì)量比的影響由表1可知，免疫性肝損傷模型組脾質(zhì)量體質(zhì)量比值顯著增加（P<0.01），而大蒜多糖