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《光合細(xì)菌分離篩選與培養(yǎng)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、光合細(xì)菌分離篩選與培養(yǎng)著色菌屬或稱紅硫菌屬的分離與純化培養(yǎng)，著色細(xì)菌與綠菌屬一樣也是光合細(xì)菌，但它們除了含有葉綠素外，還含有胡羅卜素，而且后者占優(yōu)勢(shì)。其細(xì)胞除球形外．有柱狀，偶有彎曲有莢膜及極生鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，細(xì)胞團(tuán)塊呈深淺不一的紅色或紫紅色。在有硫化氫條件下生長(zhǎng)時(shí)，能氧化硫化氫與硫，累積硫于細(xì)胞內(nèi)，而綠色硫細(xì)菌卻沉硫于細(xì)胞外。分布在有腐爛藻類植物的海泥和淡水泥中。1分離培養(yǎng)基成分及其配制，由于此種完全培養(yǎng)基的有些成分不能在高壓滅菌．或在高溫下不相容必須先制備好基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后把其他成分的無(wú)菌溶液加到冷基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。（1）基礎(chǔ)培養(yǎng)基：NH4Cl0.1克KH2PO4
2、0.1克MgCl20.05克NaCl海生種30克淡水種10克瓊脂20克水925毫升，溶解以上無(wú)機(jī)鹽于水中，加入瓊脂，加熱至121℃15分鐘，使瓊脂溶解，分裝于試管或螺旋口瓶里．121℃蒸汽下滅菌15分鐘。不加瓊脂可作為液體培養(yǎng)基。（2）無(wú)菌碳酸氛鈉溶液：將NaHCO35克加水至100毫升，在121℃蒸汽下滅菌15分鐘。（3）無(wú)菌硫化鈉溶液：此液既作為HS-的來(lái)源，又起脫氧劑作用，若是預(yù)先配制，必須把它保存在沒(méi)有氧的密閉容器里，否則應(yīng)在臨用前配制。取Na2S·9H2O5克加水至100毫升，在121℃蒸汽下滅菌15分鐘．（4）完全培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基（融化冷至45℃）
3、10毫升NaHCO3溶液0.4毫升Na2S9H2O0.2毫升，依次無(wú)菌地如到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，混勻后可用。2.分離與純化培養(yǎng)（1）分離培養(yǎng)：在廣口玻璃瓶底放一層0.5-1厘米厚的混有腐爛海藻的海泥，用海水覆蓋，暴露于光下。直至培養(yǎng)器最靠近光源的壁上長(zhǎng)出紅色菌為止。這些紅色生長(zhǎng)物通常含有著色菌．它的生長(zhǎng)決定于泥中硫酸鹽的還原，和隨后釋放的H2S。（2）純化培養(yǎng)①深層試管法：a、選取具有著色菌特征的紅色生長(zhǎng)物（已用顯微鏡檢查過(guò)細(xì)胞形態(tài)），放于一定量的完全培養(yǎng)液中，混勻。b．準(zhǔn)備一系列深層融化的完全培養(yǎng)基管，并保存在45℃水溶中，將混勻于培養(yǎng)液中的生長(zhǎng)物稀釋成一系列稀釋度
4、。c．每支試管用經(jīng)160℃滅菌1小時(shí)的固體石蠟和液體石蠟1:1的混合物覆蓋，每管蓋2厘米高。d曝光于25-28℃下培養(yǎng)，3-77天后完全分開(kāi)的紅色菌落出現(xiàn)在較高的稀釋度里。選擇一支合適的試管培養(yǎng)物表面滅菌，切斷玻璃，移去管子，然后在無(wú)菌的培養(yǎng)皿里，以無(wú)菌操作法把菌落解剖出來(lái)。e.在無(wú)菌的完全培養(yǎng)基里乳化菌落，并在一系列稀釋度中重復(fù)以上操作培養(yǎng)，保證純度。純培養(yǎng)物可在這些深層瓊脂里保存，2個(gè)月移種一次。②瓊脂培養(yǎng)基劃線法：將紅色生長(zhǎng)物在完全培養(yǎng)基平板上劃線接種，于厭氧條件下曝光25-28℃，培養(yǎng)4-7天．挑出典型菌落，重新劃線培養(yǎng)，直到純化為止。純化后可保存在深層
5、完全培養(yǎng)基中．紅螺菌屬的富集培養(yǎng)與分離：其中包括紅色紅螺菌（或稱深紅紅螺菌）、度光紅螺菌、巨大紅螺菌、長(zhǎng)形紅螺菌、纖細(xì)紅螺菌（或稱細(xì)小紅螺菌）、棕黃色紅螺菌（或稱黃褐紅螺菌），此類細(xì)菌均生長(zhǎng)于水和淤泥中，屬厭氧或微嗜氧菌，在厭氧條件下．于光亮中能合成有機(jī)物．細(xì)胞螺旋狀盤繞，長(zhǎng)度不一，有不等數(shù)蜷曲．同種細(xì)胞的大小變化很大，有端生叢毛，能運(yùn)動(dòng)。細(xì)胞內(nèi)含有菌紫素。菌綠素和類胡羅卜素等．故細(xì)菌呈紅色、褐紅色、絳紅色或玫瑰色不一。1．富集培養(yǎng)（1）培養(yǎng)基成分及配制：NH4Cl1.0克K2HPO40.5克MgCl20.2克NaCl0.1克酵母膏0.1克H2O900毫升，將上
6、面各物溶解于水，在121℃蒸汽下滅菌20分鐘。分別制備及過(guò)濾除菌下列各液：①5克碳酸氫鈉加50毫升蒸餾水溶解。②乙醇或4%丙氨酸．③0.1N的磷酸溶液。在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入碳酸氫鈉溶液和1.5-2.0毫升乙醇或50毫升4%丙氨酸．用0.1N的磷酸調(diào)pH至7.0（2）富集培養(yǎng)：①最適的接種物是暴露在光下的富含有機(jī)物的淤泥。接種時(shí)，放淤泥于50毫升的帶玻璃塞的磨口瓶中．酌量放一層。②加滿培養(yǎng)基，塞好塞于，隔絕空氣。③置于30℃的照明箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)物放在離照明的25瓦鎢絲燈4英寸處。④觀察通常在3天內(nèi)可見(jiàn)到液體培養(yǎng)基里和淤泥曝光的一側(cè)呈現(xiàn)微紅色的生長(zhǎng)物。⑤從微紅色處取1
7、毫升的富集培養(yǎng)物，接種于第二瓶的富集培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2天．2．分離培養(yǎng)（1）培養(yǎng)基成分及配制：從上面的富集培養(yǎng)基中加酵母膏至0.2%，及1.5-2.0克瓊脂（但碳酸氫鈉應(yīng)改為2克），制法同上。另取Na2S·9H2O1克，加水10毫升，于121℃蒸汽下滅菌15分鐘，在調(diào)pH7之前將此液加到分離培養(yǎng)基中，分裝，滅菌后制成平板或柱狀培養(yǎng)基。（2）接種：取富集培養(yǎng)物于分離平板培養(yǎng)基上劃線或涂布接種．或用搖管法于柱狀培養(yǎng)基中分離．后者由于硫化鈉在培養(yǎng)基深處把氧氣迅速消耗，很快就形成厭氧條件。如用前一種分離法，可用焦性沒(méi)食子酸和碳酸鈉造成厭氧條件．或于其他的缺氧條件下培養(yǎng)，挑
8、選具有此類細(xì)菌特征的菌落
