dna和rna提取方法及原理 和 提取方法及原理 dna提取專題 dna提取專題第一部分

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1、DNA和RNA提取方法及原理和提取方法及原理DNA提取專題DNA提取專題第一部分液溶液基因組DNA－基因組DNA－其它方法根據(jù)細(xì)胞裂解方式的不同有：根據(jù)細(xì)胞裂解方式的不同有：物理方式：玻璃珠法、超聲波法、研磨法、物理方式：玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法化學(xué)方式：異硫氰酸胍法、化學(xué)方式：異硫氰酸胍法、堿裂解法生物方式：生物方式：酶法基因組DNA－基因組DNA－其它方法根據(jù)核酸分離純化方式的不同有：根據(jù)核酸分離純化方式的不同有：吸附材料結(jié)合法：吸附材料結(jié)合法：???硅質(zhì)材料高鹽低pH值結(jié)合核酸，低鹽高pH值洗脫。高鹽低pH值結(jié)合核酸，

2、低鹽高pH值洗脫。pH值結(jié)合核酸pH值洗脫快捷高效?？旖莞咝?。陰離子交換樹脂低鹽高pH值結(jié)合核酸，高鹽低pH值洗脫。低鹽高pH值結(jié)合核酸，高鹽低pH值洗脫。pH值結(jié)合核酸pH值洗脫適用于純度要求高的實(shí)驗(yàn)。適用于純度要求高的實(shí)驗(yàn)。磁珠磁性微粒掛上不同基團(tuán)可吸附不同的目的物，從而達(dá)到分離目的。從而達(dá)到分離目的?；蚪MDNA－基因組DNA－其它方法濃鹽法：濃鹽法：利用RNP和DNP在鹽溶液中溶解度不同，將二者分離和在鹽溶液中溶解度不同，利用在鹽溶液中溶解度不同有機(jī)溶劑抽提法：有機(jī)溶劑抽提法：有機(jī)溶劑作為蛋白變性劑，有機(jī)溶劑作為蛋白變性劑，同

3、時(shí)抑制核酸酶的降解作用密度梯度離心法：密度梯度離心法：利用不同內(nèi)容物密度不同的原理分離各種內(nèi)容物質(zhì)粒DNA－質(zhì)粒DNA－堿裂解法堿裂解法原理染色體DNA比質(zhì)粒DNA分子大得多，且染色體DNA為染色體DNA比質(zhì)粒DNA分子大得多，且染色體DNA為線狀分DNA比質(zhì)粒DNA分子大得多DNA而質(zhì)粒DNA為共價(jià)閉合環(huán)狀分子；DNA為共價(jià)閉合環(huán)狀分子子，而質(zhì)粒DNA為共價(jià)閉合環(huán)狀分子；當(dāng)用堿處理DNA溶液時(shí)，線狀染色體DNA容易發(fā)生變性，當(dāng)用堿處理DNA溶液時(shí)，線狀染色體DNA容易發(fā)生變性，共DNA溶液時(shí)DNA容易發(fā)生變性價(jià)閉環(huán)的質(zhì)粒DNA在回到

4、中性pH時(shí)即恢復(fù)其天然構(gòu)象；DNA在回到中性pH時(shí)即恢復(fù)其天然構(gòu)象價(jià)閉環(huán)的質(zhì)粒DNA在回到中性pH時(shí)即恢復(fù)其天然構(gòu)象；變性染色體DNA片段與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片結(jié)合形成沉變性染色體DNA片段與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片結(jié)合形成沉DNA而復(fù)性的超螺旋質(zhì)粒DNADNA分子則以溶解狀態(tài)存在液相淀，而復(fù)性的超螺旋質(zhì)粒DNA分子則以溶解狀態(tài)存在液相從而可通過離心將兩者分開。中，從而可通過離心將兩者分開。質(zhì)粒DNA－質(zhì)粒DNA－堿裂解法堿裂解法流程圖對(duì)數(shù)期菌體上清液沉淀溶液I充分重懸溶液充分重懸抽提干燥溶解溶液II裂解溶液裂解酒精沉淀質(zhì)粒DNA溶液溶液

5、質(zhì)粒溶液III中和溶液中和離心洗滌質(zhì)粒DNA－質(zhì)粒DNA－煮沸法煮沸法原理染色體DNA比質(zhì)粒DNA分子大得多，且染色體DNA為染色體DNA比質(zhì)粒DNA分子大得多，且染色體DNA為線狀分DNA比質(zhì)粒DNA分子大得多DNA而質(zhì)粒DNA為共價(jià)閉合環(huán)狀分子；DNA為共價(jià)閉合環(huán)狀分子子，而質(zhì)粒DNA為共價(jià)閉合環(huán)狀分子；當(dāng)加熱處理DNA溶液時(shí)，線狀染色體DNA容易發(fā)生變性，當(dāng)加熱處理DNA溶液時(shí)，線狀染色體DNA容易發(fā)生變性，共DNA溶液時(shí)DNA容易發(fā)生變性價(jià)閉環(huán)的質(zhì)粒DNA在冷卻時(shí)即恢復(fù)其天然構(gòu)象；DNA在冷卻時(shí)即恢復(fù)其天然構(gòu)象價(jià)閉環(huán)的質(zhì)粒DN

6、A在冷卻時(shí)即恢復(fù)其天然構(gòu)象；變性染色體DNA片段與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片結(jié)合形成沉變性染色體DNA片段與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片結(jié)合形成沉DNA而復(fù)性的超螺旋質(zhì)粒DNADNA分子則以溶解狀態(tài)存在液相淀，而復(fù)性的超螺旋質(zhì)粒DNA分子則以溶解狀態(tài)存在液相從而可通過離心將兩者分開。中，從而可通過離心將兩者分開。細(xì)胞器DNA－細(xì)胞器DNA－差速離心法線粒體和葉綠體是生物體內(nèi)半自主性細(xì)胞器，線粒體和葉綠體是生物體內(nèi)半自主性細(xì)胞器，自身可編碼蛋它們的比重和大小一定比重和大小一定，白，它們的比重和大小一定，因而在同一離心場(chǎng)內(nèi)的沉降速度也一定，根據(jù)這一原理

7、，常用不同轉(zhuǎn)速的離心法，也一定，根據(jù)這一原理，常用不同轉(zhuǎn)速的離心法，將細(xì)胞內(nèi)各種組分分級(jí)分離出來(lái)。種組分分級(jí)分離出來(lái)。差速離心法原理是利用物質(zhì)比重的不同分離混合物的一種方法。是利用物質(zhì)比重的不同分離混合物的一種方法。將待分離物質(zhì)置于均勻介質(zhì)（蔗糖）將待分離物質(zhì)置于均勻介質(zhì)（蔗糖）中，以一定的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心，比重大的物質(zhì)優(yōu)先沉降，比重小的卻處于上層，行離心，比重大的物質(zhì)優(yōu)先沉降，比重小的卻處于上層，從而得以分離。從而得以分離。內(nèi)容第一部分：第一部分：DNA提取方法簡(jiǎn)介提取方法簡(jiǎn)介第二部分：DNA提取及常見問題分析第二部分：提取及常見問題分

8、析DNA提取的基本步驟DNA提取的基本步驟I.材料準(zhǔn)備I.材料準(zhǔn)備II.破碎細(xì)胞或包膜－II.破碎細(xì)胞或包膜－內(nèi)容物釋放破碎細(xì)胞或包膜III.核酸分離、III.核酸分離、純化核酸分離IV.沉淀或吸附核酸，IV.沉淀或吸附