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《8 脂肪干細胞無血清培養(yǎng)基》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、BioWiseTechCo.,LTD.AdvCell?脂肪干細胞無血清培養(yǎng)基AdvCell?脂肪干細胞無血清培養(yǎng)基（BSFMOO02）根據(jù)細胞的生長需要，培養(yǎng)基包含必需和非必需氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質、血清替代物以及其他補給成分。非常適用于培養(yǎng)哺乳類脂肪干細胞。產品嚴格無菌，無病毒和支原體，性能穩(wěn)定，使用該培養(yǎng)基能使干細胞在理想營養(yǎng)平衡狀態(tài)下進行多代擴增而不發(fā)生分化（至少10代以內）?！锂a品號CatNo:BSFMOO02名稱產品號規(guī)格貯藏條件運輸AdvCell?脂肪干細胞基礎培養(yǎng)基AdvCell?AdiposeStemCellSer
2、umfreeMediumBM0002500ml2-8℃避光冰袋/常溫AdvCell?細胞墊AdvCell?CellpadBCP0001100ml2-8℃避光冰袋/常溫AdvCell?脂肪干細胞培養(yǎng)添加劑AAdvCell?AdiposeStemCellCultureSupplementABSFM0002A20ml-20℃避光干冰AdvCell?脂肪干細胞培養(yǎng)添加物BAdvCell?AdiposeStemCellCultureSupplementBBSFM0002B1ml-20℃避光干冰★產品組成★產品適用范圍適用于人及哺乳類來源的脂肪干細胞的培養(yǎng)。★使用注意事項www.
3、biotowntek.com3BioWiseTechCo.,LTD.1.完全培養(yǎng)基的制備：將以上AdvCell?脂肪干細胞無血清培養(yǎng)基（BSFMOO02）中的AdvCell?脂肪干細胞基礎培養(yǎng)基（BM0002）、AdvCell?脂肪干細胞培養(yǎng)添加劑A（BSFM0002A）以及AdvCell?脂肪干細胞培養(yǎng)添加物B（BSFM0002B）于37℃解凍并迅速混合。2.完全培養(yǎng)基的存儲：配制好的完全培養(yǎng)基放在4℃冰箱避光保存，并盡量在一個月內使用完。3.根據(jù)需要，培養(yǎng)過程中可添加一定劑量青霉素∕鏈霉素(P∕S)。4.為達到最佳培養(yǎng)效果，所有細胞培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶在接種細胞前用細胞
4、墊材料（Cellpad）（BCP0001）包被過夜或室溫包被2小時，包被后用吸管取走多余的AdvCell?細胞墊材料（BCP0001），再接種胞。5.如客戶用自己配制的凍存液凍存的細胞是用作臨床治療，應避免用甘油作為保護劑?！锱囵B(yǎng)條件37℃，5%CO2，無菌恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)?！锛毎囵B(yǎng)【復蘇】1.將配置好的完全培養(yǎng)基放入37℃水浴中預熱5-15min；2.從液氮中取出細胞迅速放入37℃水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)孵育細胞）；3.在超凈臺中加入5ml的完全培養(yǎng)基重懸細胞，1000rpm離心5min；4.棄上清，加入5ml的完全培養(yǎng)基重懸細胞，轉移到T-25培養(yǎng)瓶中（帶濾芯
5、）；5.將培養(yǎng)瓶置于37℃，5%CO2的無菌恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；6.第二天用新鮮的完全培養(yǎng)基給細胞換液?！九囵B(yǎng)】1.在顯微鏡下觀察細胞，當細胞融合度達到80%時，即可傳代；2.37℃水浴預熱完全培養(yǎng)基；3.在超凈臺中，棄掉T-25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，加入2mlPBS清洗，再加入1ml?0.25%胰酶-EDTAwww.biotowntek.com3BioWiseTechCo.,LTD.消化細胞；4.在顯微鏡下觀察到細胞變圓，有細胞開始脫離瓶壁時，即可加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化；5.用移液器輕輕吹打瓶壁上剩余的細胞，并輕輕吹打將細胞吹散；6.將細胞轉移到15ml離心管中
6、，1000rpm離心5min；7.棄上清,加入15-20ml的完全培養(yǎng)基重懸細胞后轉入T-75細胞培養(yǎng)瓶中或按適當比例傳到T-25細胞培養(yǎng)瓶中。確保后融合度在25-50%之間，細胞密度在1×104cells/cm2?（2.5×105?cells/T-25瓶），混合細胞懸液，確保細胞均勻分布；8.將細胞培養(yǎng)瓶置于37℃，5%CO2的無菌恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；9.每兩天用新鮮、預熱的完全培養(yǎng)基進行換液?！緝龃妗?.細胞消化和計數(shù)，用胰酶對待凍存的細胞進行消化，并對細胞進行計數(shù)。2.1000rpm離心5min，去掉上清。3.根據(jù)細胞計數(shù)的情況，加入適量的凍存液，使細胞密度在1×
7、106/ml左右（或根據(jù)自己希望達到的細胞密度）。4.輕輕地重懸細胞（務必重懸均勻），將重懸的細胞按等份加入到滅菌的凍存管（需提前做好標記或者貼上標簽）中，旋緊凍存管蓋。5.將凍存管放入程序降溫凍存盒中，然后將凍存盒直接放入-80℃。6.第二天將細胞從-80℃轉移到液氮中。www.biotowntek.com3
