四嗪二甲酰胺誘導(dǎo)白血病細胞株shi 凋亡及其分子機制研究_論文

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1、四嗪二甲酰胺誘導(dǎo)白血病細胞株SHI1凋亡及其分子機制研究作者：周永列，呂亞萍，胡惟孝，邱蓮女，王文松，劉建棟，吳建國【摘要】　　本研究探討四嗪二甲酰胺（ZGDHu1）誘導(dǎo)白血病細胞株SHI1凋亡作用的機制。以不同濃度的ZGDHu1在體外培養(yǎng)SHI1細胞，用細胞形態(tài)學(xué)、DNA凝膠電泳、DNA含量及細胞周期分析、AnnexinV/PI雙標記和Hoechst33258熒光染色等分析細胞凋亡。用Rh123/PI測定線粒體跨膜電位（ΔΨm），用流式細胞術(shù)檢測ZGDHu1誘導(dǎo)SHI1細胞凋亡過程中

2、bcl2、bax、p53、Fas蛋白和線粒體膜蛋白的表達變化。用RTPCR觀察經(jīng)ZGDHu1作用后SHI1細胞bcl2、bax、p53基因表達改變；同時利用實時熒光PCR定量檢測端粒酶hTERTmRNA表達的變化。結(jié)果表明：ZGDHu1能誘導(dǎo)SHI1細胞凋亡，呈作用時間和劑量的量效關(guān)系，出現(xiàn)典型的細胞形態(tài)改變，DNA片段化，亞G1峰檢出并顯著增加；AnnexinV/PI和Hoechst33258熒光染色后細胞發(fā)生凋亡的特征性改變。SHI1細胞經(jīng)不同濃度的ZGDHu1體外培養(yǎng)后，b

3、cl2基因和蛋白有所下調(diào)，但主要是bax基因和蛋白上調(diào)，導(dǎo)致bax/bcl2比值明顯增高，18/18p53基因和蛋白與Fas蛋白表達也上調(diào)，均呈劑量依賴性。隨ZGDHu1作用濃度的增加，ΔΨm下降，而線粒體膜蛋白表達顯著升高，端粒酶hTERTmRNA的表達顯著下調(diào)。結(jié)論：ZGDHu1通過上調(diào)p53基因、bax基因和bax/bcl2比值，使線粒體跨膜電位顯著下降的線粒體通路是ZGDHu1誘導(dǎo)細胞凋亡的途徑之一，F(xiàn)as也參與其中，端粒酶有可能是其抗腫瘤的作用靶點。【關(guān)鍵詞】四嗪二甲酰胺　細胞

4、株　SHI1　細胞凋亡　線粒體　端粒酶　AbstractTheaimofstudywastoinvestigatethemechanismofN,N′di(mmethylphenyl)3,6dimethyl1,4dihydro1,2,4,5tetrazine1,4dicarboamide(ZGDHu1)inducingapoptosisinSHI1humanleukemiacellline.DifferentconcentrationsofZGDHu1anddiffere

5、nttimesofculturewereusedtotreatSHI1cells;theapoptosisofSHI1cellswasanalyzedbymorphology,DNAagarosegelelectrophoresis,DNAcontentdetection,AnnexinV/PIandHoechst33258labelingmethod,themitochondrialtransmembrancepotential（ΔΨm）weremeasuredbydihydrorhodami

6、n123,andexpressionsofbcl2,bax,Fas,p53andmitochondrialmembraneproteinwereanalyzedby18/18flowcytometry,whilethebcl2,baxandp53genewereanalyzedbyRTPCR.ThetranscriptionallevelofhTERTmRNAwasmeasuredbyrealtimefluorescencequantitativeRTPCR.Theresultsshowe

7、dthatafterexposuretoZGDHu1,SHI1cellswereinducedtoapoptosisinatimeanddoesdependentmanner.SHI1cellapoposiswascomfirmedbytypicalcellmorphology,DNAfragmentation,subG1phase,Hoechst33258andAnnexinⅤ/PIlabelingetc.Theexpressionofbax,bax/bcl2,p53andFasge

8、nesignificantlyincreasedandbcl2slightlydecreased.ZGDHu1couldincreasedtheexpressionofmitochondrialmembraneproteininadosedependentmannerwhileΔΨmreduced.TheexpressionofhTERTmRNAsignificantlydecreased.ItisconcludedthatZGDHu1canu