實(shí)驗(yàn)四蛋白酶活力的測(cè)定方法

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1、目錄實(shí)驗(yàn)講義第一部分啤酒工藝綜合實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一還原糖的測(cè)定3實(shí)驗(yàn)二α-氨基氮的測(cè)定（茚三酮法）4實(shí)驗(yàn)三雙乙酰（紫外分光光度法）5實(shí)驗(yàn)四總酸（電位滴定法）6實(shí)驗(yàn)五酒精度7實(shí)驗(yàn)六原麥汁濃度（蒸餾——密度法）9實(shí)驗(yàn)七真正發(fā)酵度(實(shí)際發(fā)酵度)10實(shí)驗(yàn)八協(xié)定法糖化和外加酶糖化法11第二部分通風(fēng)發(fā)酵綜合實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一淀粉質(zhì)原料的水分測(cè)定12實(shí)驗(yàn)二原料中粗淀粉的測(cè)定13實(shí)驗(yàn)三還原糖的測(cè)定17實(shí)驗(yàn)四蛋白酶活力的測(cè)定方法19實(shí)驗(yàn)五糖化酶的測(cè)定方法22實(shí)驗(yàn)六玉米淀粉液化及糖化24實(shí)驗(yàn)七面包酵母流加培養(yǎng)與分批培養(yǎng)試驗(yàn)27實(shí)驗(yàn)八糖化

2、酶的發(fā)酵和提取實(shí)驗(yàn)31實(shí)驗(yàn)九酸性蛋白酶固態(tài)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)3433第一部分啤酒工藝綜合實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一還原糖的測(cè)定1原理本法是利用含有自由醛基的還原糖，在堿性溶液中，能將二價(jià)銅還原成氧化亞銅的性質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。2儀器下端彎曲與管身成直角的滴定管。3試劑（1）0.1N硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：溶26克硫代硫酸鈉及0.2克無(wú)水碳酸鈉于1000ml水中。緩和煮沸10min，冷卻。將溶液保存于棕色具塞瓶中，放置一周后過(guò)濾備用。標(biāo)定：稱取于120℃烘至恒重的重鉻酸鉀0.2克，稱準(zhǔn)至0.0002克，置于500ml具塞錐形瓶中，溶于2

3、5ml煮沸并冷卻的水中，加2克碘化鉀及20ml4N的硫酸。待碘化鉀溶解后，于暗處放置10min，加250ml水，用0.1N硫代硫酸鈉溶液滴定，近終點(diǎn)時(shí)加3ml0.5%淀粉指示劑，繼續(xù)滴定至溶液由藍(lán)色轉(zhuǎn)變成亮藍(lán)綠色。同時(shí)作空白試驗(yàn)校正結(jié)果。硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液當(dāng)量濃度N按下式計(jì)算：N=G/0.04903V式中：G——重鉻酸鉀的重量（克）V——硫代硫酸鈉溶液的用量（ml）0.04903——每毫克當(dāng)量重鉻酸鉀的克數(shù)（2）4N的硫酸溶液邊攪拌邊將56ml的濃硫酸小心地加入到約350ml蒸餾水中，并定容至500m

4、l。（3）0.5%淀粉溶液1.25g可溶性淀粉，加少量水調(diào)成糊狀，在不斷攪拌下注入200ml沸水中，微沸2min，冷卻，加水稀釋成250ml。（4）30%醋酸溶液取29.8ml無(wú)水乙酸，用水定容至100ml.（5）斐林溶液A.硫酸銅溶液溶34.639克硫酸銅于水中，稀釋至500.0ml。B.堿性酒石酸鹽溶液溶173克酒石酸鉀鈉，50克氫氧化鈉溶于水中，稀釋至500.0ml。4標(biāo)定：取10.00ml斐林溶液的A液，加4ml30%醋酸溶液和3g碘化鉀，加25ml煮沸后冷卻的水，使碘化鉀溶解，以0.1N33

5、硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定溶液呈微黃色，加硫氰酸銨2g，0.5%淀粉溶液3ml，攪拌后，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失。斐林溶液的校正系數(shù)f計(jì)算如下：式中：V——0.1N硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的用量（ml）0.006355——每毫升0.1N硫代硫酸鈉溶液相當(dāng)?shù)你~的克數(shù)0.01748——每毫升斐林溶液的A液中含有的銅的克數(shù)（6）次甲基藍(lán)指示液，1%1g次甲基藍(lán)溶于100ml水中。5操作步驟（1）取糖化試驗(yàn)的麥芽汁，稀釋至20倍或更合適的倍數(shù)，使其滴定量在15～50ml之間。（2）預(yù)備實(shí)驗(yàn)取斐林溶液A、B各5.0ml，置錐形

6、瓶中，加10ml水稀釋，加熱使其于5min內(nèi)沸騰，在沸騰狀態(tài)下用滴定管滴入稀釋麥芽汁至藍(lán)色即將消失時(shí)，加1～2滴次甲基藍(lán)指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，記錄所用稀釋麥芽汁的數(shù)量。（3）正式測(cè)定在200ml錐形瓶中加入斐林溶液A、B各5.0ml，再加少于預(yù)備實(shí)驗(yàn)所用1ml的麥芽汁，加熱至沸后，加1～2滴次甲基藍(lán)指示液，用稀釋麥芽汁滴至終點(diǎn)，記錄用去稀釋麥芽汁的總量。6計(jì)算根據(jù)稀釋麥芽汁在正式測(cè)定中的用量，查表得相應(yīng)麥芽糖量，再用下式計(jì)算：查表得100ml麥芽汁中麥芽糖毫克數(shù)1000總還原糖（麥芽糖，g/ml

7、麥汁）＝f×n或f×查表得100ml麥芽汁中麥芽糖毫克數(shù)×n1000×G×D總還原糖（麥芽糖，g/100g浸出物）＝式中：f——斐林溶液系數(shù)n——稀釋倍數(shù)G——麥芽汁中浸出物含量（%）D——麥芽汁20℃比重注意事項(xiàng)：（1）本測(cè)定的操作條件必須嚴(yán)格控制，加熱時(shí)間、滴定速度每次測(cè)定都必須一致，由沸騰至滴定完畢必須在3min內(nèi)結(jié)束，否則應(yīng)重做。（2）用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定斐林溶液，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度應(yīng)正好0.1000N，否則計(jì)算時(shí)應(yīng)把用量換算成相當(dāng)于0.1000N的用量。33實(shí)驗(yàn)二α-氨基氮的測(cè)定（茚三酮法）

8、1、實(shí)驗(yàn)試劑a顯色劑100克磷酸氫二鈉（Na2HPO4.12H2O）60克磷酸二氫鉀（KH2PO4）5.00克水合茚三酮3.00克果糖用水溶液溶解后稀釋至1升（此溶液在低溫下用棕色瓶可保存2周，pH應(yīng)為6.6-6.8。操作時(shí)可以按比例配成100ml）。b稀釋溶液：2克碘酸鉀溶于600ml水中，再加入96%乙醇400ml.c標(biāo)準(zhǔn)溶液：溶107.2mg甘氨酸于100ml水中，0℃貯藏。用時(shí)按要求稀釋。該溶液含有200mgα-氨基氮/升。2、實(shí)驗(yàn)操作取糖化的麥