黃連hplc數(shù)字化指紋圖譜研究及7種生物堿含量測(cè)定

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1、黃連HPLC數(shù)字化指紋圖譜研究及7種生物堿含量測(cè)定　　[摘要]該文建立了峨眉地區(qū)道地藥材黃連的HPLC數(shù)字化指紋圖譜，并將其在全國(guó)不同主產(chǎn)區(qū)的黃連測(cè)定中進(jìn)行了應(yīng)用，同時(shí)測(cè)定黃連中7種季胺型生物堿的含量，為科學(xué)評(píng)價(jià)與有效控制黃連質(zhì)量提供依據(jù)。采用DiamonsilC18色譜柱（4、6mm×250mm，5μm），流動(dòng)相乙腈-0、025mol?L-1KH2PO4溶液（磷酸調(diào)pH3、0）（40∶60），內(nèi)含SDS1、7g?L-1，流速1、2mL?min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)345nm，柱溫40℃。運(yùn)用中藥色譜指紋圖譜

2、相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（國(guó)家藥典委員會(huì)）進(jìn)行分析，10批次峨眉產(chǎn)黃連樣品得到的指紋圖譜相似度均大于0、99，標(biāo)定共有峰10個(gè)，并對(duì)其中8個(gè)色譜峰進(jìn)行了歸屬。全國(guó)5個(gè)黃連主產(chǎn)區(qū)樣品與峨眉產(chǎn)黃連進(jìn)行相似度分析比較，整體相似度高。同時(shí)對(duì)黃連藥材中g(shù)roenlandicine，非洲防己堿，藥根堿，表小檗堿，黃連堿，巴馬汀，小檗堿7種主要生物堿進(jìn)行了含量測(cè)定。該方法靈敏度高、專屬性強(qiáng)，HPLC指紋圖譜結(jié)合生物堿含量測(cè)定能全面反應(yīng)其內(nèi)在質(zhì)量，為黃連的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。　　[關(guān)鍵詞]黃連；HPLC；指紋圖譜；含量測(cè)定　

3、　[收稿日期]2013-05-03　　[基金項(xiàng)目]科技部國(guó)家科技支撐計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目（2007BA140B05）；中國(guó)博士后科學(xué)基金第6批特別資助項(xiàng)目（2013T60863）　　[通信作者]*張浩，教授，博士生導(dǎo)師，Tel：（028）85503037，E-mail：zhanghhx@vip、sina、com黃連為毛茛科植物黃連CoptischinensisFranch、的干燥根莖，常用中藥材，主產(chǎn)于四川峨眉、洪雅、彭州，重慶石柱、巫山，湖北利川等地[1]，其中峨眉?xì)v來(lái)是黃連的道地主產(chǎn)區(qū)，栽培歷史悠久，在歷

4、代本草《名醫(yī)別錄》、《唐本草》、《本草綱目》等中均有記載[2]。黃連中所含的生物堿主要有小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿、藥根堿等[3-4]季胺型生物堿。小檗堿及其衍生物除了具有抗炎抗菌[5-6]的作用外，還在治療腫瘤[7-10]、糖尿病[11-14]、心血管疾病[15-16]、高血脂[17]、腦缺血性損傷[18]等多方面具有藥理作用。中藥的化學(xué)成分復(fù)雜，在質(zhì)量控制中采用單一成分或某幾個(gè)成分難以反映中藥材的整體特征，建立簡(jiǎn)便可行的指紋圖譜方法，確定其特征的共有峰圖譜，是從整體上控制其質(zhì)量已成為普遍運(yùn)用

5、的方法[19-21]。本文采用HPLC，選擇了四川峨眉地區(qū)具代表性的10批次黃連藥材樣品進(jìn)行了分析測(cè)定，以生物堿類成分作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，建立了峨眉山地區(qū)黃連藥材的生物堿指紋圖譜，確定了10個(gè)共有峰，其分離度和重現(xiàn)性均較好，同時(shí)測(cè)定了7種季胺型生物堿的含量。并且為了準(zhǔn)確反應(yīng)與評(píng)價(jià)生物堿類成分在黃連內(nèi)的形成、積累等與環(huán)境影響因素的關(guān)系，本文將所建立的方法在全國(guó)不同主產(chǎn)區(qū)進(jìn)行了應(yīng)用，結(jié)果表明整體相似度均在0、99以上，但在生物堿的含量上存在較大差異?！　?材料　　ShimadzuLC-10Atvp高效液相色譜儀

6、（LC-10Atvp泵、SPD-10Avp紫外檢測(cè)器、CTO-01Asvp柱溫箱、SCL-10Avp系統(tǒng)控制器、Class-vp色譜工作站）；DiamonsilC18色譜柱（4、6mm×250mm，5μm）；中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（中國(guó)藥典委員會(huì)2004A）；BP211D1/10萬(wàn)電子天平（德國(guó)Sartorius公司）；KQ3200超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司，工作頻率40kHz，超聲功率120W）；pH計(jì)（PHS-3C型，上海雷磁）?！　∫译妫绹?guó)Fisher公司）色譜純，水為超純水，

7、其他試劑均為分析純?！　↑S連對(duì)照藥材、鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸藥根堿對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；黃連堿、表小檗堿、非洲防己堿、groenlandicine、木蘭花堿由作者分離、純化制備，并經(jīng)紅外、紫外、核磁、質(zhì)譜鑒定，純度均達(dá)99%（相對(duì)純度）以上?！　↑S連藥材由作者采集及四川大學(xué)華西藥學(xué)院標(biāo)本室提供，經(jīng)四川大學(xué)華西藥學(xué)院生藥教研室張浩教授鑒定為黃連C、chinensis的干燥根莖，見(jiàn)表1。　　表1黃連藥材樣品　　Table1SamplesofCoptidisRhizoma　　No、采集地

8、點(diǎn)No、采集地點(diǎn)1四川峨眉山市龍池鎮(zhèn)高萬(wàn)村9四川峨眉山市川主鄉(xiāng)荷葉村2四川峨眉山市龍池鎮(zhèn)陶淵村10四川峨眉山市大為鎮(zhèn)中山村3四川峨眉山市龍池鎮(zhèn)金川村11四川彭州白鹿鎮(zhèn)4四川峨眉山市龍池鎮(zhèn)富友村12四川峨眉山市洪雅高廟5四川峨眉山市沙溪鄉(xiāng)林壩村13湖北利川6四川峨眉山市高廟鎮(zhèn)黃茅村14四川巫山7四川峨眉山市高橋鎮(zhèn)張溝村15重慶石柱8四川峨眉山市龍門鄉(xiāng)楊林村　　2方法與結(jié)果　　2、1色譜條件　　流動(dòng)相為乙腈-0、025mol?L-1KH2PO4溶液（磷酸調(diào)p