關(guān)節(jié)炎丸對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎治療作用的實驗研究.doc

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1、關(guān)節(jié)炎丸對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎治療作用的實驗研究【摘要】目的：探討關(guān)節(jié)炎丸治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用機制。方法：制作實驗性關(guān)節(jié)炎大鼠(AdjuvantArthritis,AA)動物模型，觀察關(guān)節(jié)炎丸對大鼠血漿TNFα及IL1β影響，并與雷公藤陽性對照組進行比較。結(jié)果：關(guān)節(jié)炎丸抑制炎癥組織中TNFα及IL1β優(yōu)于雷公藤組。結(jié)論:關(guān)節(jié)炎丸通過影響炎癥介質(zhì)的釋放而產(chǎn)生抗炎鎮(zhèn)痛和抗風(fēng)濕作用?！娟P(guān)鍵詞】關(guān)節(jié)炎丸；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；佐劑類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoidarthritis，RA)是一種以關(guān)節(jié)滑膜炎癥為特征的慢性全身性自身免疫性疾病，它具有表現(xiàn)復(fù)雜、反復(fù)發(fā)作、纏綿難愈，致殘率高的特點

2、，為臨床疑難雜病之一。導(dǎo)師牟慧琴教授近十年來一直從事于張仲景經(jīng)典著作《金匱要略》教學(xué)與內(nèi)科臨床，主攻疑難雜證，在風(fēng)濕病、類風(fēng)濕疾病、老年性腰腿病、面癱、哮喘病、神經(jīng)官能癥、婦女更年期疾病、眩暈病、萎縮性胃炎等方面都有較為深刻的認識，尤其在診治類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎方面積累了豐富的經(jīng)驗并頗具特色，導(dǎo)師通過對臨床經(jīng)驗的總結(jié)研制出便于RA患者服用并可鞏固療效的中成藥“關(guān)節(jié)炎丸”，在臨床中療效顯著。經(jīng)初步藥效學(xué)研究表明，關(guān)節(jié)炎丸對實驗性佐劑性關(guān)節(jié)炎有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛作用，為進一步探討關(guān)節(jié)炎丸治療RA的作用機理,我們用Wistar大鼠制作AA模型,觀察關(guān)節(jié)炎丸抗風(fēng)濕的作用機理，現(xiàn)將實驗資料報告如下：1材料與

3、方法1.1實驗動物與分組Wistar大鼠50只，雌雄各半，年齡為45-50d，體重(200±20)g，購于甘肅中醫(yī)學(xué)院動物科研實驗中心(實驗動物質(zhì)量合格證編號和實驗動物使用許可證號：SCXK(H)2004-0006-0000005)，動物飼料：由上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司提供。50只大鼠雌雄分開，于實驗前馴養(yǎng)1周后，按體重編號，隨機分為5組(每組雌雄各半)：正常對照組(正常組n=10);模型對照組(模型組,n=10)；關(guān)節(jié)炎丸高劑量治療組(GJYWH組，n=10)；關(guān)節(jié)炎丸低劑量治療組(GJYWL組,n=10)；雷公藤治療組(雷公藤組,n=10)。1.2藥品與試劑關(guān)節(jié)炎丸由制附片、制

4、川烏、細辛、黨參、黃芪、桂枝、白芍、甘草等配伍組成,其中制附片、制川烏、細辛應(yīng)先煎30min后再把其余藥放入一起水煎、過濾并加熱濃縮致相應(yīng)濃度。雷公藤片劑由湖南協(xié)力藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(批號:Z43020138，國藥準(zhǔn)字)，給藥時臨時研粉調(diào)制，將5mg的雷公藤片研末再加入50ml的水配成溶液。完全福氏佐劑(CFA)購于Sigma公司；TNFα試劑盒由北京科美東雅生物技術(shù)有限公司提供(生產(chǎn)批號：20060725)，IL1β由北京華英生物技術(shù)研究所提供。1.3AA大鼠模型制備與檢測方法3在實驗第一天進行造模:用75%酒精對除正常對照組外大鼠右足跖進行消毒，將CFA0.1ml/只，注射于大鼠右

5、足跖皮下(于后肢足跖皮內(nèi)注射FCA0.1ml的量能明顯提高AA大鼠造模的成功率，較以前文獻報道的FCA0.05ml注射量，背部多點注射法等有較大的改進［１］)。正常對照組大鼠則注射生理鹽水0.lml/只。各組動物最后一次灌胃后，禁食不禁水24h后全部處死取材。血清標(biāo)本的制備：股動脈采血5ml，37℃水中靜置0.5h，以3000轉(zhuǎn)/min,離心15min，取上清液放入尖底試管中，置于4℃冰箱內(nèi)保存，送蘭州解放軍總院藥物研究所待測TNFα及IL1β。1.4給藥方法給藥第3d起開始定時灌胃給藥，每日1次,根據(jù)人和動物間按體表面積折算的等效劑量比值，關(guān)節(jié)炎丸濃煎液GJYWH組每次3ml/只，

6、GJYWL組每次1.5ml/只,灌胃前將藥液靜置到室溫，搖勻給藥；雷公藤多甙片溶液研制后給予每次2ml/只，搖勻給藥；正常組、模型組給予等量生理鹽水。1.5統(tǒng)計學(xué)處理對所有符合實驗方案要求的數(shù)據(jù)均輸入計算機,用SPSS11.0統(tǒng)計軟件處理，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，根據(jù)方差齊性采用單因素方差分析(OneWayANOVN)P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果各組大鼠血清IL1β、TNFα含量的比較(見表1)注：與空白組比較#P＜0.05；與模型組比較△P＜0.05。3討論　　RA的病因與發(fā)病機制目前尚未完全闡明,但隨著細胞分子學(xué)和免疫學(xué)的深入研究,RA動物模型的建立,發(fā)現(xiàn)了細

7、胞因子、TH1/TH2細胞平衡、性激素等在RA的發(fā)病中起重要作用。其中人們已證實TNFα及IL1β在RA進展中起著決定性作用［2］：TNFα是機體炎癥反應(yīng)與免疫應(yīng)答的重要調(diào)節(jié)因子,能刺激滑膜細胞和軟骨細胞合成PGE2和膠原酶,導(dǎo)致關(guān)節(jié)局部滑膜炎癥和軟骨組織破壞,TNFα既能刺激IL1β,IL6,IL8的產(chǎn)生,又能刺激其自身的合成，在RA的細胞因子網(wǎng)絡(luò)中起中心作用；IL1分為IL1α和IL1β,主要由巨噬細胞分泌，