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《心肌肥厚實(shí)驗(yàn)方案》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、一、實(shí)驗(yàn)方法1L-甲狀腺素致大鼠心肌肥厚模型取50只220-250gSD雄性大鼠，隨機(jī)分為6組，每組10只。分別為：空白組、模型組、玄參高劑量組、玄參中劑量組、玄參低劑量組、卡托普利（陽(yáng)性對(duì)照藥）。制備大鼠心肌肥厚模型。除正常組外，各組連續(xù)7d腹腔注射L-甲狀腺素0.25mg·kg-1·d-1，1次/天，制成心肌肥厚模型；正常組腹腔注射等量注射生理鹽水。各給藥組在給予L-甲狀腺素后以玄參高、中、低液灌胃給藥；正常組、模型組給予等量生理鹽水灌胃。連續(xù)給藥9天，于處理前禁食不禁水12h，取血和心肌進(jìn)行
2、各項(xiàng)分析。2大鼠心肌質(zhì)量指數(shù)的測(cè)定大鼠心肌肥厚指數(shù)的測(cè)定：取大鼠稱體重(BW)后腹主動(dòng)脈取血?？焖俅蜷_(kāi)胸腔取心臟，去除心房組織，分離左、右心室，生理鹽水漂洗去血，用濾紙吸干表面水分，電子天平準(zhǔn)確稱取左心室重量和全心重量。計(jì)算左心室重量/體重(LVW/BW)、全心重量/體重(HW/BW)，分別記為左心室肥厚指數(shù)(LVWI)、全心肥厚指數(shù)(HWI)。3心肌組織AngⅡ含量的測(cè)定組織勻漿制備：各組大鼠取血后，取左心室心肌組織約300mg/份，在4℃的生理鹽水中漂洗2次，除去血液，濾汁拭干。用分析天平稱重
3、，迅速置于冰浴中的微型手動(dòng)勻漿器中，加入重量為組織重量9倍的4℃生理鹽水，碾磨約10min制成勻漿，以3000r/min離心15min，取上清液置-70℃冰箱保存，待測(cè)。取上清液200ul加生理鹽水800ul制備成2%的心肌組織勻漿。按血管緊張素Ⅱ試劑盒說(shuō)明書及考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)試盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，測(cè)定AngⅡ及蛋白濃度，結(jié)果以每毫克蛋白中的AngⅡ含量表示。4心肌組織SOD、MDA活性測(cè)定去上清液，配置成一定濃度的組織勻漿，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書，用分光光度法檢測(cè)心肌超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛
4、(MDA)含量。同時(shí)進(jìn)行蛋白測(cè)定，按考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)試盒說(shuō)明書操作。結(jié)果以每毫克蛋白中的SOD活性表示。5心房利鈉肽ANP的含量測(cè)定血清ANP含量測(cè)定：用ELESA法測(cè)定，常規(guī)方法取血并分離血清，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明操作。locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisC
5、arpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame二、造模方法的依據(jù)甲狀腺素可以素激活了循環(huán)和組織中的RAS，使血管緊張素Ⅱ的含量增加；增加腎上腺素能受體的表達(dá)；L-Thy誘導(dǎo)的心肌重構(gòu)具有缺血缺氧性損傷的特點(diǎn)，心肌線粒體中SOD活性降低，MDA含量升高。（1）甲狀腺素激活了循環(huán)和組織中的RAS，在體內(nèi)和離體實(shí)驗(yàn)中均發(fā)現(xiàn)甲狀腺素直接刺激了腎素mRNA，加速了血管緊張素原的合成和分泌，血管緊張素(AngⅡ)生成增加，同時(shí)AngⅡ受
6、體數(shù)目上調(diào)。AngⅡ是腎素血管緊張素系統(tǒng)的主要效應(yīng)激素，對(duì)心室重構(gòu)起著核心的作用，局部的AngⅡ水平對(duì)重構(gòu)起了決定性的作用，AngⅡ能增加細(xì)胞DNA和RNA的含量及代謝轉(zhuǎn)換，增加細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成，可使心肌細(xì)胞增生、肥大，促進(jìn)心臟重構(gòu)肥厚。它的促肥厚作用起始于它和特異受體(如AT1受體)的結(jié)合，再經(jīng)受體后的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路而完成。（2）增加腎上腺素能受體的表達(dá)，甲狀腺素對(duì)兒茶酚胺等激素的作用能產(chǎn)生重要影響，當(dāng)循環(huán)中存在大量甲狀腺素時(shí)，可增加腎上腺素能受體表達(dá),，促進(jìn)心肌受體數(shù)目上調(diào)及提高其對(duì)兒茶酚胺
7、的敏感性。（3）氧化應(yīng)激作用L-Thy誘導(dǎo)的心肌重構(gòu)具有缺血缺氧性損傷的特點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，給予L-Thy后大鼠心肌線粒體中SOD活性降低，MDA含量升高且心肌線粒體中Na+，K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活力均顯著升高。三、所測(cè)得的指標(biāo)心臟指數(shù)：是一項(xiàng)病理學(xué)指標(biāo)，是反映左心功能不全程度較為準(zhǔn)確的指標(biāo)，所以采用動(dòng)物心室重構(gòu)模型時(shí)，可用心臟指數(shù)來(lái)評(píng)價(jià)左心功能不全的嚴(yán)重程度。超氧化物歧化酶SOD、MDA：SOD是心肌組織內(nèi)重要的抗氧化物酶，MDA為脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的主要終產(chǎn)物，測(cè)定其含量可間接反應(yīng)機(jī)體中
8、自由基水平及脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)程度。心房利鈉肽ANP：是由心房肌細(xì)胞合成和釋放的一類多肽。它具有強(qiáng)烈的拍鈉利尿的作用，并使血管平滑肌舒張，外周阻力降低，使心率減慢，心輸出量減少，血壓降低。此外，它還有抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的作用，間接的促進(jìn)Na+的排泄，以及抑制血管升壓素的作用。當(dāng)血容量增加和血壓升高時(shí)，心房肌細(xì)胞釋放心房鈉尿肽，引起利尿和拍鈉效應(yīng)。因此，它是體內(nèi)調(diào)節(jié)水鹽平衡的一種重要的體液因素。心肌肥厚、急性心力衰竭、慢性心力衰竭、急性心肌梗死、心肌重塑、左心功能障礙和急性
