胎兒有核細(xì)胞篩選技術(shù)概述

《胎兒有核細(xì)胞篩選技術(shù)概述》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。

1、母體外周血胎兒細(xì)胞篩選2011.11.22背景介紹美國2006年發(fā)布的“全球出生缺陷報告”中顯示：全世界每年出生缺陷兒超過800萬，90%發(fā)生在中低收入國家，每年至少有330萬5歲以下兒童死于出生缺陷，約320萬存活缺陷兒終生殘疾。我國是世界上出生缺陷高發(fā)國家之一，全國出生缺陷總發(fā)生率約為11‰-14‰，且呈逐年上升趨勢。中國每年有約2000萬嬰兒出生，其中約有20-30萬肉眼可見先天畸形兒，加上出生后數(shù)月和數(shù)年才顯現(xiàn)出來的缺陷，中國先天殘疾兒童總數(shù)高達(dá)80-120萬，約占每年出生人口總數(shù)的4％-6％。2007年全國前5位的出生缺陷疾病依次為：先天性心臟病、多指(趾)、唇裂、神

2、經(jīng)管缺陷和先天性腦積水，發(fā)生率分別為25.1/萬、16.3/萬、13.1/萬、7.2/萬和6.8/萬。據(jù)統(tǒng)計，我國目前的出生缺陷死亡率為30%，殘疾率為40%，只有30%可以治愈或糾正。如果對所有存活的出生缺陷和殘疾提供治療、康復(fù)和福利，全國每年要投入300億元人民幣。2產(chǎn)前診斷3又稱宮內(nèi)診斷，是指胎兒出生前采用各種方法預(yù)測其是否有先天性疾?。òɑ魏瓦z傳性疾?。?，為能否繼續(xù)妊娠提供科學(xué)依據(jù)。目前真正能做到產(chǎn)前診斷的病種很少，可分以下幾類：(1)染色體病(2)性連鎖遺傳病(3)先天性代謝異常(4)血液系統(tǒng)遺傳病(5)胎兒的神經(jīng)管畸形(6)胎兒先天畸形產(chǎn)前診斷方法包括創(chuàng)傷性方法

3、和非創(chuàng)傷性方法，從形態(tài)學(xué)、染色體、酶學(xué)、代謝產(chǎn)物和基因五個水平進(jìn)行。目前產(chǎn)前診斷仍以創(chuàng)傷性方法為主，并以羊膜腔穿刺最為常用。產(chǎn)前診斷方法4創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷方法主要包括：絨毛膜穿刺術(shù)：采取羊膜囊之外的絨毛膜，進(jìn)而分析胎兒的染色體，最早可在懷孕10-12周進(jìn)行。羊膜穿刺術(shù)：目的是為取得羊水中的胎兒細(xì)胞，在懷孕大約14-20周進(jìn)行。羊水細(xì)胞主要來自胎兒的皮膚、胃腸道、呼吸道、泌尿生殖道的粘膜脫落細(xì)胞。經(jīng)體外培養(yǎng)后，可進(jìn)行染色體分析、酶和蛋白質(zhì)檢測、性染色質(zhì)檢查、提取DNA作基因分析，也可不經(jīng)培養(yǎng)，用微量技術(shù)作酶和蛋白質(zhì)分析或直接提取DNA作基因診斷。胎兒鏡和胚胎活組織檢查：主要用于胎兒

4、血的取樣、活檢，也可對胎兒形態(tài)異常進(jìn)行觀察，于懷孕15-21周進(jìn)行操作。臍血取樣：經(jīng)母腹抽取胎兒靜脈血，可在B超引導(dǎo)下于孕中期、晚期（17-32周）進(jìn)行。創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷可能引起流產(chǎn)（絨毛膜穿刺1.4-2.7%，羊膜穿刺0.5%）、早產(chǎn)、感染、母體免疫反應(yīng)、胎兒畸形、甚至胎兒死亡等并發(fā)癥。非創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷方法主要包括：超聲檢查X線或核磁共振成像檢查母體血清檢測：AFP，β-hCG等母體外周血胎兒細(xì)胞檢測5母血中主要存在兩種來源的胎兒細(xì)胞，一種是胎盤細(xì)胞，如合體滋養(yǎng)細(xì)胞和細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞；另一種是胎兒血細(xì)胞，如淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞及胎兒有核紅細(xì)胞。滋養(yǎng)細(xì)胞是最早出現(xiàn)在母血中的胎兒細(xì)胞（孕4

5、-5周起），但在進(jìn)行產(chǎn)前診斷最佳時期即孕早期時，只有極少量的滋養(yǎng)細(xì)胞出現(xiàn)在母血中。滋養(yǎng)細(xì)胞可以在體外培養(yǎng)，但其多核特征及嵌合型核型會干擾遺傳學(xué)結(jié)果分析，不利于用于產(chǎn)前診斷。胎兒淋巴細(xì)胞于孕14周出現(xiàn)于母體血循環(huán)中。有學(xué)者利用HLA-A2抗原作為標(biāo)記，結(jié)合FACS從孕婦外周血中分離到胎兒細(xì)胞。但由于HLA抗原系統(tǒng)有較高的個體特異性，且需知道父母雙方的HLA類型，所以將它直接用于臨床還有一定的困難。同時，由于胎兒淋巴細(xì)胞產(chǎn)后可持續(xù)存在于母體數(shù)年，故診斷可能受既往妊娠的影響。針對胎兒粒細(xì)胞的研究較少，可能是特異性單克隆抗體較難尋找。目前認(rèn)為胎兒有核紅細(xì)胞是用于產(chǎn)前診斷的最理想細(xì)胞類型

6、：從孕6周至分娩持續(xù)存在于母體外周血中；每40ml母血中有100-1000個，而正常人外周血中幾乎沒有；在母血中生命周期較短，約為90天；屬單核細(xì)胞，含有胎兒的全部遺傳信息，且易從形態(tài)學(xué)上辨別；表達(dá)數(shù)種特異性抗原，如轉(zhuǎn)鐵蛋白受體CD71，以及獨特的胎兒血紅蛋白ε,γ鏈等。母體外周血胎兒細(xì)胞目前許多學(xué)者都致力于解決胎兒細(xì)胞的識別、富集和如何排除母血的“污染”等。已有用單克隆抗體或以細(xì)胞表面特異性抗原的抗體作為標(biāo)記等來識別胎兒細(xì)胞，結(jié)合富集和純化技術(shù)的完善，如果方法能更加簡便、經(jīng)濟(jì)，將可能在遺傳病的預(yù)防中發(fā)揮作用。富集方法：化學(xué)方法：根據(jù)抗原-抗體結(jié)合，如FACS、MACS；物理方

7、法：根據(jù)細(xì)胞密度或在電場和緩沖液中的遷移，如梯度離心、電泳遷移。純化技術(shù)：胎兒細(xì)胞的標(biāo)記；單細(xì)胞操作技術(shù)。外周血胎兒細(xì)胞篩選6方法原理備注FACS熒光染料標(biāo)記的抗體與細(xì)胞表面特異性抗原標(biāo)記物結(jié)合，然后用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。FACS方法可以高純度富集、分類細(xì)胞，允許多參數(shù)分類，并適合于細(xì)胞內(nèi)抗原的應(yīng)用[1]。MACS使用磁珠結(jié)合特異性抗體，在外加磁場的作用下靶細(xì)胞能向一定方向移動，從而得到富集。MACS的優(yōu)點是快速、批量、便宜，適合處理大量細(xì)胞時使用[1]；缺點是NRBCs純化度較低[2]?；?/p>