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《ASPM調(diào)控Wnt_β-catenin信號(hào)通路介導(dǎo)肝癌發(fā)生的機(jī)制研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、學(xué)校代碼10459學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)?01512263049密級(jí)公開(kāi)碩士學(xué)位論文ASPM調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路介導(dǎo)肝癌發(fā)生的機(jī)制研究作者姓名：李智慧導(dǎo)師姓名：張海風(fēng)副教授學(xué)科門(mén)類(lèi)：理學(xué)專業(yè)學(xué)位名稱：生物化學(xué)與分子生物學(xué)培養(yǎng)院系：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院完成時(shí)間：2018年5月Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterASPMPromotesHepatocarcinogenesisThroughWnt/β-CateninSi
2、gnalingPathwayByZhihuiLiSupervisor:Prof.HaifengZhangDepartmentofBiochemistryandMolecularBiologySchoolofMedicalSciencesMay,2018ASPM調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路介導(dǎo)肝癌發(fā)生的機(jī)制研究研究生：李智慧導(dǎo)師：張海風(fēng)副教授鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系河南鄭州，450001摘要肝癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)生發(fā)展是一個(gè)與多種基因的異常改變相關(guān)的復(fù)雜過(guò)程，迄今具體的分子機(jī)制尚不完
3、全清楚。人類(lèi)異常紡錘體樣小頭畸形相關(guān)蛋白基因(HumanAbnormalSpindle-likeMicrocephaly-associated,ASPM），位于染色體1q31，全長(zhǎng)62528bp,編碼區(qū)長(zhǎng)10434bp，由28個(gè)外顯子構(gòu)成。最初發(fā)現(xiàn)其在胚胎期神經(jīng)形成中起關(guān)鍵作用，控制大腦的容量，其基因突變與神經(jīng)發(fā)育缺陷性的常染色體隱性遺傳小頭畸形的主要原因發(fā)病相關(guān)。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)ASPM在增殖旺盛的組織及腫瘤組織中高表達(dá)。我們前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)ASPM在肝癌組織中表達(dá)水平明顯上調(diào)，由此，我們推測(cè)ASPM可能參與肝
4、癌的發(fā)生、發(fā)展。經(jīng)典的Wnt/β-catenin信號(hào)在大多數(shù)的肝癌中都異?；罨?，我們前期研究發(fā)現(xiàn)，ASPM在肝癌組織中的表達(dá)水平與β-catenin的表達(dá)水平顯著相關(guān)。基于此，我們提出ASPM可能通過(guò)調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)途徑影響肝癌的發(fā)生發(fā)展。本課題主要從兩個(gè)方面進(jìn)行研究：（1）ASPM在肝癌組織與癌旁組織中的表達(dá)水平、臨床病理學(xué)意義及其與Wnt/β-catenin信號(hào)通路中重要開(kāi)關(guān)分子的關(guān)系；（2）ASPM對(duì)肝癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制研究。I方法1人肝組織中ASPM的表達(dá)水平及臨床病理學(xué)意義
5、研究1.1應(yīng)用RT-qPCR法檢測(cè)肝癌及癌旁組織中ASPMmRNA的表達(dá)水平，分析ASPM在肝癌及癌旁組織中的表達(dá)水平及與臨床病理學(xué)意義；1.2應(yīng)用WesternBlotting及免疫組化方法檢測(cè)肝癌及癌旁組織中ASPM蛋白的表達(dá)水平，分析ASPM蛋白在肝癌及癌旁組織的水平；1.3應(yīng)用RT-qPCR法檢測(cè)肝癌及癌旁組織中Wnt/β-catenin信號(hào)通路中重要開(kāi)關(guān)分子mRNA的表達(dá)水平，分析ASPM與Wnt/β-catenin信號(hào)通路中重要開(kāi)關(guān)分子mRNA表達(dá)水平的相關(guān)性。2ASPM對(duì)肝癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響及機(jī)
6、制研究2.1應(yīng)用RT-qPCR方法檢測(cè)肝癌細(xì)胞株中ASPM的表達(dá)水平，篩選出干擾效果最優(yōu)shASPM序列，構(gòu)建慢病毒介導(dǎo)的ASPM-shRNA肝癌細(xì)胞株；2.2用CCK-8、劃痕修復(fù)、Transwell實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)穩(wěn)定沉默ASPM對(duì)肝癌細(xì)胞增殖能力、遷移能力以及侵襲能力的影響；2.3運(yùn)用WesternBlotting技術(shù)檢測(cè)穩(wěn)定沉默ASPM及對(duì)照組中Wnt/β-catenin信號(hào)通路中Dvl-2、β-catenin、TCF4、LEF1的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果1人肝組織中ASPM表達(dá)水平及臨床病理學(xué)意義1.1人肝組織中AS
7、PMmRNA的表達(dá)水平及臨床病理學(xué)意義利用RT-qPCR的方法，對(duì)102例人肝標(biāo)本ASPMmRNA進(jìn)行定量，其中肝癌組織和非癌組織各96例，配對(duì)的癌與癌旁組織90例。結(jié)果顯示肝癌組織中ASPMmRNA表達(dá)水平顯著高于癌旁組織（P<0.00001）。90例配對(duì)的樣本中，69例肝癌組織ASPM高表達(dá)，高表達(dá)率為76.7%。對(duì)102例肝癌組織及癌旁組織按照腫瘤大小、肝硬化程度、AFP表達(dá)水平分組分析ASPMmRNA表達(dá)差異，結(jié)果顯示，各分組中癌組織均顯著高于癌旁組織（P<0.05）。值得注意的是，患者AFP在正常范圍（AF
8、P≤20ng/mL），肝癌組織中ASPMmRNA表達(dá)水平依然顯著高于癌旁組織（P=0.048）。根據(jù)有無(wú)癌栓、有無(wú)血管侵犯、腫瘤分化程度分析發(fā)現(xiàn)，發(fā)生癌栓、有血管侵犯、中分化及低分化組，肝癌組織中ASPMmRNA表達(dá)水平顯著高于癌旁組織（P≤0.01）。而高分化，無(wú)癌栓及無(wú)血管侵犯組肝癌組織ASPMmRNA表達(dá)水平與癌旁組織II相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義
