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《醫(yī)藥學(xué)醫(yī)學(xué)畢業(yè)論文 免疫細胞分泌研究進展》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、湖南師范大學(xué)本科畢業(yè)論文考籍號：XXXXXXXXX姓名：XXX專業(yè)：醫(yī)藥學(xué)醫(yī)學(xué)論文題目：免疫細胞分泌研究進展指導(dǎo)老師：XXX二〇一一年十二月十日 摘要：細胞分泌活動涉及一系列復(fù)雜的分子活動和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程,它是許多重要生命活動如神經(jīng)遞質(zhì)的釋放、內(nèi)分泌激素分泌、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運等的基礎(chǔ)。故而有關(guān)細胞分泌活動的研究近年在國際上形成一個新的熱點。有關(guān)免疫細胞中細胞因子的分泌機制研究的較少,將膜電容測量、電化學(xué)測量、光學(xué)測量、胞內(nèi)信號分子光解等近年發(fā)展起來的生物物理方法引入免疫學(xué)領(lǐng)域,對研究免疫細胞的分泌調(diào)控和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)意義重大。細
2、胞分泌活動是生物體信息傳遞和細胞功能的基本過程之一,如神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)遞質(zhì)和激素的分泌、免疫系統(tǒng)中細胞因子和抗體的分泌等。細胞分泌活動涉及一系列復(fù)雜的分子活動和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程,隨著新技術(shù)尤其是細胞分泌檢測技術(shù)的不斷出現(xiàn),這一過程正在被逐步揭示出來。目前對神經(jīng)遞質(zhì)釋放的研究已經(jīng)很深入,而對免疫細胞分泌活動尤其是細胞因子分泌的動力學(xué)和分泌調(diào)控機制的研究則相對較少。將膜電容測量、電化學(xué)測量、光學(xué)測量、細胞內(nèi)信號分子光解等生物物理方法引入免疫學(xué)領(lǐng)域,可能為免疫細胞分泌的調(diào)控和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)研究提供大量有意義的數(shù)據(jù),從而盡快填補該領(lǐng)域的
3、研究空白?！ ?單細胞分泌實時測量的新方法 細胞分泌活動的傳統(tǒng)研究方法主要采用ELISA、RIA、FACS等階段性定量測定或冰凍蝕刻電鏡技術(shù)、普通光學(xué)顯微鏡技術(shù)等形態(tài)學(xué)研究方法,都屬于非現(xiàn)場靜態(tài)研究,并且是大量細胞共同3期婁雪林等:免疫細胞分泌研究進展生理學(xué)報ActaPhysiol.Sin.54卷測定。近年來,各種實時監(jiān)測技術(shù)的發(fā)展極大地促進了人們對細胞分泌機制的了解。下面就目前常用的三種細胞分泌實時檢測技術(shù)的原理、方法以及優(yōu)缺點作簡要介紹?！ ?.1膜電容測量 近10年來,膜電容檢測技術(shù)在研究細胞胞吐和胞飲機制
4、方面得到了越來越廣泛的應(yīng)用［1］。細胞分泌的最后一步是囊泡膜與胞漿膜融合的過程,當(dāng)分泌發(fā)生時細胞膜的表面積會增加,而細胞膜的電容大小正比于細胞膜的表面積(～1μF/cm2),因此細胞膜電容的增加就代表細胞分泌量。這種技術(shù)對囊泡分泌的時間分辨率極高(～ms),常用來研究分泌事件與離子通道活動以及細胞內(nèi)第二信使的關(guān)系。最近出現(xiàn)的細胞貼附膜片電容技術(shù),膜電容分辨率可達到0.1fF,能檢測到直徑60nm的小囊泡分泌［2］。這一方法為研究單個小囊泡的分泌活動如膜融合孔開閉動力學(xué)、膜融合事件的分子調(diào)控等提供了強有力的工具。由于胞
5、吐后囊泡膜的回收會導(dǎo)致膜電容的減少,因此膜電容檢測技術(shù)也能提供囊泡胞飲過程的信息?！ ∧る娙轀y量技術(shù)可用于神經(jīng)細胞、內(nèi)分泌細胞、免疫細胞等大多數(shù)細胞的分泌測量,而且測量精度和時間分辨率都較高,但該方法不能排除胞吞對胞吐檢測的影響,并且對試驗條件如封接電阻(Rm)、串聯(lián)電阻(Rs)的要求很高,對于一些較復(fù)雜結(jié)構(gòu)如神經(jīng)軸突終末、與周邊細胞有電學(xué)偶聯(lián)的細胞等則不能用該技術(shù)進行研究?！ ?.2電化學(xué)測量 用電化學(xué)技術(shù)監(jiān)測細胞分泌的原理是:在電極尖端表面施加一定的電壓,容易氧化的化學(xué)信使物質(zhì)就會在電極尖端釋放出電子而發(fā)生氧化
6、,電極可獲得電子并產(chǎn)生一定的電流［3］。微電極的電流大小與電極尖端面積和實驗類型有關(guān),一般在pA到nA范圍,通常采用膜片鉗放大器等低噪聲儀器進行檢測。對單個分泌電流峰積分即可估算出每個囊泡中包含的遞質(zhì)分子數(shù),即量子包裝的大小。施加的電壓可為恒電位或三角波循環(huán)電壓,前者的優(yōu)點是時間分辨率高,后者的優(yōu)點是能區(qū)分不同的信息分子。在單細胞胞吐測量時兩種方法可以互相補充。目前兒茶酚胺、5-HT、胰島素、組胺、nO以及含色氨酸或酪氨酸殘基的多肽激素或遞質(zhì)都可直接或間接地使用該方法檢測［16］。 電化學(xué)技術(shù)監(jiān)測分泌的最大優(yōu)點是時
7、間分辨率高(ms級),能監(jiān)測單個囊泡的釋放以及囊泡中的遞質(zhì)含量,且較膜電容測量更為直觀;其次具有一定的細胞空間分辨率,可用于測定細胞釋放熱區(qū)(hotspot);另外,該方法對細胞無損傷,可進行長時間監(jiān)測。但是電極只能檢測到少部分信息物質(zhì)(10％左右),而且對于那些不能被氧化的物質(zhì)的釋放不能直接檢測［16］。本方法常與膜電容方法聯(lián)合應(yīng)用來研究分泌事件,以相互補充?！ ?.3細胞分泌的光學(xué)測量 用普通光學(xué)顯微鏡只能檢測巨大囊泡的分泌過程,而新的熒光染料的開發(fā)和顯微成像技術(shù)的發(fā)展使實時監(jiān)測小囊泡的分泌成為可能［4］。FM
8、1-43和FM4-64等是有效的研究分泌活動的選擇性膜表面熒光標(biāo)記物,它們在水相中沒有熒光,當(dāng)它們插入脂質(zhì)膜后則顯示較強的熒光,囊泡膜胞吐后會使細胞表面熒光增加,而胞吞回收的囊泡因吞進細胞周圍的染料而被熒光標(biāo)記,這樣便能夠?qū)崟r觀察細胞的胞吐及胞吞過程。本方法的缺點是背景熒光較大,fM染料目前尚不能用于腦片等組織切片的分泌研究。另一種方法是通過基
