腦缺血動物模型與抗腦缺血

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1、腦缺血動物模型腦缺血動物模型動物模型是醫(yī)學(xué)藥學(xué)研究中的一個重要手段，尤其對于缺血性腦血管病，能即刻制造或模擬血流下降或阻斷，只有利用動物模型才能進(jìn)行。動物模型具有方便、快捷、條件可控、腦缺血程度一致等優(yōu)點。近年來，腦缺血的研究進(jìn)展有利于各種動物模型的廣泛應(yīng)用。建立和選擇理想的缺血性腦損傷動物模型，對于缺血性腦血管病研究具有重要意義。腦缺血動物模型對以下研究具有很重要的實際應(yīng)用價值:(1)不同腦缺血狀態(tài)下的病理學(xué)改變；(2)缺血半暗帶的研究；(3)再灌注損傷；(4)缺血本身導(dǎo)致的病理生理學(xué)變化；(5)干預(yù)治療對缺血性損害的保護(hù)作用；(6

2、)缺血性損害的部分機(jī)制等。腦缺血動物模型的分類各種動物模型具有不同的特點，因此應(yīng)根據(jù)不同的研究目的選擇最適宜的動物模型。根據(jù)動物種類分類：可分為猴、狗、大鼠、小鼠等腦缺血模型。其中嚙齒類動物因價格便宜、來源充足、制作模型方法簡單、存活率高、腦血管解剖和生理特點與人接近，被廣泛用作腦缺血及缺血再灌注模型；根據(jù)缺血范圍分類：又可分為全腦缺血和局灶性缺血兩種?，F(xiàn)將常見的腦缺血動物模型概述如下：一、全腦缺血模型(Globalcerebralischemiamodels)全腦缺血模型是完全阻斷或驟然降低大腦的血流，造成全腦缺血。近年來利用嚙齒類

3、動物復(fù)制全腦缺血模型，在缺血性腦損傷的研究中較為廣泛。共同特點：缺血暫時廣泛地影響各個腦區(qū)，但病理改變發(fā)生在易損區(qū)。大鼠四血管阻斷模型[TheFour-VesselOcclusion(4VO)ModelintheRat]大鼠四腦動脈阻塞模型：雙側(cè)椎動脈和雙側(cè)頸總動脈阻斷。用3％水合氯醛麻醉（300mg/kg,ip.）。然后于枕骨下作1cm左右切口，暴露第一頸椎左右兩個橫突孔，以1411高頻小電刀插入橫突孔燙閉雙側(cè)椎動脈。24h后乙醚麻醉狀態(tài)下切開顱頂皮膚，于矢狀縫與冠狀縫相交及顳骨與人字縫相交處分別埋植腦電極，接于SJ-42多導(dǎo)生理記

4、錄儀，以在實驗過程中記錄大鼠的腦電圖（EEG）及翻正反射恢復(fù)時間。將大鼠仰臥位固定，分離雙側(cè)頸總動脈。大鼠清醒狀態(tài)下用小動脈夾夾閉雙側(cè)頸總動脈，可見大鼠意識和翻正反射消失，眼變白，豎毛，呼吸加快。30min后去除動脈夾，造成再灌注模型。再灌同時股靜脈注射60mg/kg伊文思藍(lán)。60min后大鼠斷頭取腦，然后用生理鹽水和丙酮混合液（3：7v/v）制成10%勻漿（W/V）。離心，取上清液，在620nm處測吸光度表示腦組織中伊文思藍(lán)含量，以此反映受試藥對腦血管通透性的影響。優(yōu)點：①可產(chǎn)生嚴(yán)重的腦缺血。可較好地模擬臨床上多種原因造成的全腦缺血

5、性損傷過程；②缺血一定時間后可按實驗要求重新開啟動脈夾進(jìn)行再灌注。缺點：①成功率低，約50%；②操作相對復(fù)雜、不能一次完成，動物的死亡率高。該方法適合于腦缺血的急性實驗研究，現(xiàn)仍被廣泛應(yīng)用。二、局灶性腦缺血動物模型(Focalcerebralischemiamodels)由于大腦中動脈（middlecerebralartery，MCA）是腦卒中的多發(fā)部位，因此大腦中動脈閉塞(middlecerebralarteryocclusion，MCAO)模型被認(rèn)為是一種較理想的動物模型。阻斷MCA的方法主要有開顱法、線栓法以及栓塞法。最常用的是

6、線栓法線栓法(threadembolismmethod)線栓法：是目前國內(nèi)外學(xué)者制備MCAO動物模型最常用的方法。該方法是Koizumi于1986年發(fā)明的。在1989年，Longa對這種方法加以改進(jìn)，而后廣泛用于實驗性腦缺血研究。目前在腦缺血實驗中多采用Longa改進(jìn)的線栓法。1、線栓的制備在制備大鼠MCAO模型的過程中，線栓的制備頗為重要。將線分別截成50mm左右線栓，在前20mm用記號筆抹上顏色以作進(jìn)入顱內(nèi)血管深度的標(biāo)記，并將線栓制備好后置肝素生理鹽水中備用。線栓的制備主要有兩種方法：Koizumi將栓線的前段5mm左右的部分涂上

7、硅樹脂，使其變粗，變硬，直徑達(dá)0.25～0.3mm，以利于進(jìn)線和阻斷血流；Longa法是將栓線的頭端燒成小的圓頭，直徑稍大于線栓的直徑。2、線栓的插入頸外動脈切口插入法：此種方法可以用來制備腦缺血、腦缺血再灌注模型。由頸總動脈分叉處向頭端依次游離，結(jié)扎并剪斷頸外動脈的分支：枕骨下動脈和甲狀腺上動脈，在頸外動脈遠(yuǎn)端結(jié)扎，切斷頸外動脈使其主干游離備用。然后分離頸內(nèi)動脈，用絲線在頸外動脈根部打一松扣，夾閉頸總動脈和頸內(nèi)動脈。將尼龍線經(jīng)頸外動脈主干切口，緩慢向頸內(nèi)動脈入顱方向推進(jìn)，以頸總動脈分叉處為標(biāo)記，推進(jìn)18mm左右時感到阻力，即到達(dá)了較

8、細(xì)的大腦前動脈內(nèi)，阻斷了MCA的所有血供來源，扎緊頸外動脈根部松扣。在一定時間后拔出尼龍線，扎緊動脈殘端，即可實現(xiàn)MCAO導(dǎo)致局灶性腦缺血-再灌模型。圖1大鼠顱底內(nèi)外血管（部分）模式圖3、線栓法制備動物模型的影響因素栓線