miR-124對(duì)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞株增殖和侵襲的影響

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1、分類號(hào)：R738單位代碼：10159密級(jí)：公開(kāi)學(xué)號(hào)：201240040碩士學(xué)位論文（同等學(xué)力人員申請(qǐng)碩士學(xué)位）中文題目：miR-124對(duì)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞株增殖和侵襲的影響英文題目：TheeffectsofmiR-124onproliferationandinvasionofhumanosteosarcomaMG-63celllines論文作者：李毅指導(dǎo)教師：王巖峰教授學(xué)科專業(yè)：運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)完成時(shí)間：2018年3月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文miR-124對(duì)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞株增殖和侵襲的影響TheeffectsofmiR-124onprolifera

2、tionandinvasionofhumanosteosarcomaMG-63celllines論文作者李毅指導(dǎo)教師王巖峰教授申請(qǐng)學(xué)位醫(yī)學(xué)碩士培養(yǎng)單位第一臨床學(xué)院一級(jí)學(xué)科臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)研究方向運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)論文起止時(shí)間2016年1月—2018年3月論文完成時(shí)間2018年3月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)（遼寧）2018年3月2摘要目的：骨肉瘤（OS）是骨科中最為常見(jiàn)的原發(fā)惡性骨腫瘤，起源于間葉組織，其特征是能產(chǎn)生骨樣組織的梭形基質(zhì)細(xì)胞，多發(fā)生于15-25歲的兒童和青少年。好發(fā)于血運(yùn)豐富的干骺端，其中發(fā)生在股骨遠(yuǎn)端和腔骨近端約占總病例數(shù)的50％。骨肉瘤的局部破壞性強(qiáng)，

3、致殘率及死亡率高，血行轉(zhuǎn)移發(fā)生率高，因此受到研究者的廣泛重視。隨著新技術(shù)的快速發(fā)展及治療方式的不斷改善，原發(fā)部位的骨肉瘤患者的５年存活率已經(jīng)達(dá)到約70％。但是，由于其惡性程度高，預(yù)后差，轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)患者的長(zhǎng)期生存機(jī)會(huì)仍低于20％。因此，進(jìn)一步闡明骨肉瘤細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，對(duì)于骨肉瘤的預(yù)防以及相關(guān)藥物研制具有重要指導(dǎo)意義。miRNA是內(nèi)源非編碼單鏈小分子RNA，由19～25個(gè)核苷酸組成，在種群中具有高度保守性。大量的研究證據(jù)陸續(xù)表明，miRNA在肺癌、前列腺癌、肝癌、乳腺癌以及胃癌等多種腫瘤組織中的表達(dá)都出現(xiàn)異常表達(dá)，這種表達(dá)異常增高或者表達(dá)異常降低

4、與腫瘤的多種生物學(xué)行為密切相關(guān)。miR-124是一個(gè)高度保守的miRNA，在肝癌、乳腺癌、宮頸癌與黑色素瘤等多種腫瘤組織中低表達(dá)。在對(duì)甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞進(jìn)行研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，上調(diào)miR-124表達(dá)后能降低甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力，調(diào)控IQGAP1的表達(dá)可能是其抑制甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制之一。但miR-124在骨肉瘤中的確切生物學(xué)功能并不十分清楚。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)是JAK/STAT轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)通路中重要的信號(hào)因子，激活后的STAT3能夠形成同源或異源二聚體，介導(dǎo)信號(hào)從細(xì)胞外向核內(nèi)的傳遞，進(jìn)入核內(nèi)的STAT3能夠調(diào)節(jié)其下游

5、DNA的轉(zhuǎn)錄。STAT3參與體內(nèi)如細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲、血管生成等多種生物學(xué)過(guò)程，隨著研究的深入，越來(lái)越多的學(xué)者認(rèn)為STAT3是原癌基因。但是，在骨肉瘤中，STAT3的表達(dá)是否異常，其是否為miR-124的下游靶點(diǎn)，仍需要進(jìn)一步研究證實(shí)。本研究通過(guò)檢測(cè)骨肉瘤組織中miR-124表達(dá)，轉(zhuǎn)染miR-124抑制劑或miR-124模擬物后骨肉瘤MG-63細(xì)胞增殖侵襲能力變化與STAT3蛋白的表達(dá)變化，探討miR-124對(duì)骨肉瘤MG-63細(xì)胞增殖侵襲能力的影響及其機(jī)制。研究方法：1、組織標(biāo)本來(lái)自于中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科2013年1月至2016年6月的27

6、例骨肉瘤組織和鄰近正常骨組織，所有標(biāo)本均由本院病理科醫(yī)生確診為骨肉瘤。人正常成骨細(xì)胞系hFOB1.19和骨肉瘤細(xì)胞系MG-63均購(gòu)I中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文自中科院上海細(xì)胞研究所。miR-124模擬物、抑制劑與陰性對(duì)照購(gòu)自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司，lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑、Trizol試劑與及RIPA裂解液購(gòu)自Invitrogen公司，STAT3單克隆抗體購(gòu)自CellSignaling公司，Transwell小室和Matrigel膠均購(gòu)買(mǎi)于美國(guó)BD公司。超低溫冰箱（日本SANYO公司）；熒光倒置顯微鏡（日本Nikon公司）；紫外分光光

7、度儀（德國(guó)Eppendorf公司）；熒光定量PCR儀ABI7500（美國(guó)ABI公司）；BiofugeStratos高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)Heraeus公司）；PCR擴(kuò)增儀（美國(guó)Beckman公司）。2、培養(yǎng)人正常成骨細(xì)胞系hFOB1.19與骨肉瘤細(xì)胞MG-63，參照Lipofectamine2000的說(shuō)明書(shū)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染；應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)骨肉瘤組織和癌旁正常骨組織miR-124的表達(dá)；應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)骨肉瘤組織和鄰近正常骨組織標(biāo)本STAT3的表達(dá)；應(yīng)用MTT方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染miR-124模擬物或抑制劑后MG-63細(xì)胞增殖能

8、力的變化；應(yīng)用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染miR-124模擬物或抑制劑后MG-63細(xì)胞增殖侵