dna分析技術(shù)在法醫(yī)物證學(xué)上的應(yīng)用

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1、DNA分析技術(shù)在法醫(yī)物證學(xué)上的應(yīng)用法醫(yī)物證學(xué)內(nèi)容親子關(guān)系鑒定個(gè)體識(shí)別親子關(guān)系鑒定親權(quán)糾紛(離婚案)移民案強(qiáng)奸致孕案拐賣丟失兒童案(醫(yī)院中)嬰兒錯(cuò)抱案(計(jì)劃生育中)超生與否的鑒定個(gè)體識(shí)別兇殺案強(qiáng)奸案碎尸案石蠟包埋組織塊調(diào)錯(cuò)案法醫(yī)物證學(xué)鑒定方法血清學(xué)方法檢驗(yàn)紅細(xì)胞血型、白細(xì)胞血型、紅細(xì)胞酶型、血清型DNA檢驗(yàn)技術(shù)DNA指紋技術(shù)、PCR擴(kuò)增技術(shù)血清學(xué)方法的局限性檢材需要量大,且對(duì)時(shí)限要求較高(HLA分型要求采血后16--24小時(shí)內(nèi)必須檢驗(yàn))不適用于陳舊、微量檢材鑒別能力有限,不宜用于同一認(rèn)定只能否定DNA檢驗(yàn)DNA核DNA線粒體DNA核DNA與線粒體DNANucleusMitoc

2、hondriamtDNA結(jié)構(gòu)D-loopD-環(huán)區(qū) (displacementloop)HV1HV2在線粒體DNA基因組中占5-7%長(zhǎng)約1100bpHV1:29-408bpHV2:15996-16401bp母系遺傳mtDNA毛發(fā)骨骼牙齒細(xì)胞細(xì)胞核核DNADNA多態(tài)性序列多態(tài)性(mtDNA、DQ、PM)片段長(zhǎng)度多態(tài)性(VNTR、STR)片段長(zhǎng)度多態(tài)性VNTR位點(diǎn)(小衛(wèi)星)重復(fù)單位17-170bpSTR位點(diǎn)(微衛(wèi)星)重復(fù)單位2-7bp長(zhǎng)度相差1個(gè)重復(fù)單位就構(gòu)成一個(gè)等位基因重復(fù)序列(在人類基因組所占比例為20-30%)散在重復(fù)序列:單拷貝DNA序列散布于基因組中在人類基因組中占10

3、%串聯(lián)重復(fù)序列:多個(gè)特定序列首尾相連而成(衛(wèi)星DNA)在人類基因組中占15-20%倒位重復(fù)序列56可變串聯(lián)重復(fù)數(shù)目41234123DNA多態(tài)性檢測(cè)方法DNA多態(tài)性檢測(cè)方法RFLP(DNA指紋技術(shù))(VNTR位點(diǎn))PCRPCR產(chǎn)物序列多態(tài)性檢測(cè)(DQ、PM)PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度多態(tài)性檢測(cè)(VNTR、STR)DNA檢測(cè)方法比較RFLP信息量大費(fèi)時(shí)(1~2周)費(fèi)力>50ngDNADNA不能降解PCR快速省力<1ngDNA適用于降解DNA復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)自動(dòng)化RFLP技術(shù)DNA指紋DNA紋印DNA指紋使用一個(gè)含有多拷貝數(shù)核心序列的多基因座DNA探針(如33.6探針或33.15探針),在低強(qiáng)度

4、條件下(較低溫度、較高鹽濃度)同時(shí)與許多VNTR基因座(約1000個(gè))雜交,經(jīng)電泳顯示其中50-100個(gè)基因座的雜交結(jié)果,獲得由一系列DNA片段譜帶組成的圖像,稱DNA指紋??蛇M(jìn)行同一認(rèn)定DNA紋印使用位點(diǎn)特異性探針,在高強(qiáng)度條件下(較高溫度、較低鹽濃度)與特定的位點(diǎn)進(jìn)行雜交,獲得DNA紋印。雜合子顯示2條譜帶,純合子顯示1條譜帶。DNA紋印特異性強(qiáng),4-6個(gè)單位點(diǎn)探針可達(dá)到同一認(rèn)定的目的。操作流程限制酶PolymeraseChainReactionPCR檢測(cè)序列多態(tài)性(斑點(diǎn))DQPolymarker長(zhǎng)度多態(tài)性(電泳條帶)VNTR’s(D1S80,amelogenin)ST

5、R’sDQa特征DQa定位于第6號(hào)染色體擴(kuò)增片段長(zhǎng)242bp人群中存在7個(gè)等位基因1.1,1.2,1.3234.1,4.2/4.3DQa基因型1.1,1.11.2,1.21.3,1.32,23,34.1,4.14.2/4.3,4.2/4.31.1,1.21.21.31.3,22,33,4.14.1,4.2/4.31.1,1.31.2,21.3,32,4.13,4.2/4.31.1,21.2,31.3,4.12,4.2/4.31.1,31.2,4.11.3,4.2/4.31.1,4.11.2,4.2/4.31.1,4.2/4.328種反向斑點(diǎn)雜交DQa分型1234C1.11.

6、21.341.3Allbut1.34.14.2/4.3樣本DNA的擴(kuò)增產(chǎn)物與互補(bǔ)序列探針在膜上雜交,顯示藍(lán)色斑點(diǎn)DQa1234C1.11.21.341.3Allbut1.34.14.2/4.3基因型:2,3DQa1234C1.11.21.341.3Allbut1.34.14.2/4.3基因型:1.2,4.1Multiplexing復(fù)合PCR擴(kuò)增Polymarker(PM)LocusAllelesGenotypesLDLRA,BAA,AB,BBGypAA,BAA,AB,BBHBGGA,B,CAA,BB,CCAB,AC,BCD7S8A,BAA,AB,BBGcA,B,CAA,BB

7、,CCAB,AC,BC972種可能的基因型PM檢測(cè)試劑條SABABABCABABCPOLYMARKERLDLRGcD7S8HBGGGypAPOLYMARKERLDLRBB,GYPAAA,HBGGABD7S8BB,GcBBSABABABCABABC辛普森(OJSimpson)被控殺人案 (1994-1995,“世紀(jì)審判”)基因座第29號(hào)血痕辛普森辛普森前妻GoldmanDQa1.1,1.2,41.1,1.21.1,1.11.3,4LDLRA、BABABABGYPAA、BBBABAAHBGGA、B、CBCABAAD7S

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