SNT1135.6-2008馬鈴薯緋腐病菌檢疫鑒定方法.pdf

《SNT1135.6-2008馬鈴薯緋腐病菌檢疫鑒定方法.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、版權(quán)所有·禁止翻制、電子傳閱、發(fā)售中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)犛犖／犜１１３５．６—２００８馬鈴薯緋腐病菌檢疫鑒定方法犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犘犺狔狋狅狆犺狋犺狅狉犪犲狉狔狋犺狉狅狊犲狆狋犻犮犪犘犲狋犺狔犫狉犻犱犵犲２００８０４２９發(fā)布２００８１１０１實施中華人民共和國發(fā)布國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局版權(quán)所有·禁止翻制、電子傳閱、發(fā)售犛犖／犜１１３５．６—２００８前言ＳＮ／Ｔ１１３５共分為六個部分：———馬鈴薯癌腫病檢疫鑒定方法；———馬鈴薯黃化矮縮病毒檢疫鑒定方法；———馬鈴薯帚頂病毒檢疫鑒定方法；———馬鈴薯黑粉病菌檢疫鑒定方法；———馬鈴薯環(huán)腐病

2、菌檢疫鑒定方法；———馬鈴薯緋腐病菌檢疫鑒定方法。本部分是ＳＮ／Ｔ１１３５的第６部分。本部分的附錄Ａ、附錄Ｂ為資料性附錄。本部分由國家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會提出并歸口。本部分起草單位：中華人民共和國云南出入境檢驗檢疫局。本部分主要起草人：曹云華、周力兵、蔣小龍、丁元明、寸東義、杜宇、劉忠善、和捷。本部分系首次發(fā)布的出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。Ⅰ版權(quán)所有·禁止翻制、電子傳閱、發(fā)售犛犖／犜１１３５．６—２００８馬鈴薯緋腐病菌檢疫鑒定方法１范圍ＳＮ／Ｔ１１３５的本部分規(guī)定了馬鈴薯緋腐病菌檢疫鑒定方法。本部分適用于馬鈴薯中緋腐病菌的檢疫和鑒定。２規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本部

3、分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本部分，然而，鼓勵根據(jù)本部分達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本部分。ＳＮ／Ｔ１１３１—２００２大豆疫霉病菌鑒定方法３原理馬鈴薯緋腐病菌（犘犺狔狋狅狆犺狋犺狅狉犪犲狉狔狋犺狉狅狊犲狆狋犻犮犪Ｐｅｔｈｙｂｒｉｄｇｅ）屬真菌界（Ｆｕｎｇｉ），卵菌門（Ｏｏｍｙｃｏｔａ），腐霉目（Ｐｙｔｈｉａｌｅｓ），腐霉科（Ｐｙｔｈｉａｃｅａｅ），疫霉屬（犘犺狔狋狅狆犺狋犺狅狉犪）。該病菌是世界馬鈴薯種植地區(qū)一很嚴(yán)重的病菌，它主要以卵

4、孢子在土壤中存活，存活期至少７年，受侵染的種薯和種薯上附著的土壤是遠(yuǎn)距離傳播的初侵染源。該病原菌的為害癥狀、孢子囊和卵孢子的形態(tài)特征是鑒定該病菌的依據(jù)。４儀器、設(shè)備４．１多功能顯微鏡（含照相裝置、測量及顯示器）。４．２體視顯微鏡。４．３恒溫恒濕培養(yǎng)箱。４．４光照培養(yǎng)箱。４．５高壓滅菌器。４．６超凈工作臺。４．７普通天平（感量１／１００）。４．８電子天平（感量１／１０００）。４．９干熱滅菌箱。４．１０普通冰箱。４．１１－２０℃低溫冰箱。４．１２培養(yǎng)皿（直徑９ｃｍ）。４．１３三角燒瓶（１０００ｍＬ，５００ｍＬ，２５０ｍＬ，５０ｍＬ）。４．１４載玻片（２５ｍｍ×７５ｍｍ，厚０．

5、８ｍｍ）。４．１５蓋玻片（１８ｍｍ×１８ｍｍ）。４．１６Ｐａｒａｆｉｌｍ膜或鋁鉑紙。４．１７凍存管（１．８ｍＬ，５．０ｍＬ）。５試劑５．１次氯酸鈉溶液。５．２碳酸鈣。１版權(quán)所有·禁止翻制、電子傳閱、發(fā)售犛犖／犜１１３５．６—２００８５．３瓊脂粉。５．４瓊脂糖。５．５匹馬霉素。５．６萬古霉素。５．７阿莫西林。５．８利福平。５．９制霉菌素。５．１０五氯硝基苯。６培養(yǎng)基６．１基礎(chǔ)培養(yǎng)基黑麥番茄汁瓊脂培養(yǎng)基、Ｖ８培養(yǎng)基（Ｖ８Ａ），其配制方法及步驟參見第Ａ．１章。６．２選擇性培養(yǎng)基使用玉米瓊脂粉加抗菌素培養(yǎng)基（Ｐ１０ＶＰ＋）或加抗菌素的黑麥番茄汁瓊脂培養(yǎng)基，在此培養(yǎng)基上培養(yǎng)的疫霉菌

6、菌絲，再轉(zhuǎn)移到Ｖ８培養(yǎng)基上可促進藏卵器的形成。配制方法參見第Ａ．２章。６．３液體培養(yǎng)基使用豌豆液體培養(yǎng)基，其配制方法及步驟參見第Ａ．３章。７檢疫鑒定方法７．１癥狀檢查馬鈴薯緋腐病菌侵染的種薯有彈力，但不軟腐似海綿狀。受侵染組織易被細(xì)菌性軟腐病菌感染而產(chǎn)生軟腐。塊莖末端或附近出現(xiàn)粉紅的腐爛。侵染的塊莖用水清洗后，病健交界明顯。切開表面暴露在空氣中２０ｍｉｎ會變成粉紅色，隨后由于氧化而變成黑色或紫褐色。這些顏色變化也和細(xì)菌性軟腐相關(guān)，但緋腐病菌常常有氨的刺激性氣味。地下馬鈴薯組織如根，匍匐莖，塊莖和莖基都會受到侵染。手壓侵染塊莖，有汁液流出，不能恢復(fù)到原來的形狀。７．２分離方

7、法７．２．１將現(xiàn)場收集的土樣稱量，每份樣１０ｇ碾碎放入５０ｍＬ的滅菌潔凈燒杯中。加入適量的滅菌蒸餾水，使土壤呈飽和濕潤狀態(tài)，但避免出現(xiàn)流水，然后用ｐａｒａｆｉｌｍ膜封口保濕，也可用無色透明塑料袋保濕。并將土樣置于２２℃～２６℃，光照條件下４ｄ～６ｄ。７．２．２在處理好的土壤中加入１０ｍＬ～１５ｍＬ蒸餾水，水面距土表１．０ｃｍ～１．５ｃｍ，然后可放入０．６％次氯酸鈉處理過的馬鈴薯葉片（直徑６ｍｍ）或番茄幼苗（在經(jīng)過滅菌的蛭石里生長４星期）誘集。７．２．３馬鈴薯葉片誘集４８ｈ～７２ｈ后取出，在滅菌紙上晾干，然后在Ｐ１０ＶＰ＋或加抗