胃癌微轉(zhuǎn)移檢測及臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展

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1、胃癌微轉(zhuǎn)移檢測及臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展【摘要】胃癌是常見的惡性腫瘤，由于缺乏特異性癥狀，早期不易發(fā)現(xiàn)；而進(jìn)展期胃癌易在微轉(zhuǎn)移基礎(chǔ)上發(fā)生轉(zhuǎn)移。近年來，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，胃癌的微轉(zhuǎn)移已成為研究熱點(diǎn)。胃癌微轉(zhuǎn)移的檢測方法包括常規(guī)HE染色法、免疫組織化學(xué)法、RT-PCR等，也可通過對腹腔沖洗液進(jìn)行檢測獲得胃癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)證據(jù)。CEA、細(xì)胞角蛋白、糖類抗原等是檢測胃癌微轉(zhuǎn)移的常用腫瘤標(biāo)記物。胃癌微轉(zhuǎn)移的檢測對胃癌患者選擇術(shù)式、確定淋巴結(jié)清除范圍、術(shù)后確立分期、建立個(gè)體化的化療方案及判斷預(yù)后均有幫助?！娟P(guān)鍵詞】胃腫瘤·微轉(zhuǎn)移·

2、腫瘤標(biāo)記物胃癌是常見的惡性腫瘤。我國胃癌患者的年死亡率為人/10萬人，在各種惡性腫瘤中居首位［1］。許多患者即使給予了標(biāo)準(zhǔn)R2根治，仍死于遠(yuǎn)處復(fù)發(fā)，可能是由于腫瘤發(fā)生了微轉(zhuǎn)移［2-4］。微轉(zhuǎn)移(micrometastases)是指在機(jī)體組織、體液及細(xì)胞移植物中檢測到的鏡下及亞顯微水平的腫瘤殘留,是常規(guī)臨床病理學(xué)方法不能檢出的、隱匿在原發(fā)灶以外組織的轉(zhuǎn)移［５-６］。目前認(rèn)為，臨床轉(zhuǎn)移一般都是由微轉(zhuǎn)移發(fā)展而來的［６］。明確腫瘤有無發(fā)生微轉(zhuǎn)移，能夠更好地對患者進(jìn)行臨床分期并指導(dǎo)治療。近年來，組織化學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的迅

3、速發(fā)展使得微轉(zhuǎn)移研究領(lǐng)域也有了較快的發(fā)展；隨著免疫組織化學(xué)和RT-PCR的發(fā)展和應(yīng)用，胃癌微轉(zhuǎn)移的檢出成為可能。1　胃癌微轉(zhuǎn)移的檢測方法　常規(guī)連續(xù)切片HE染色法　連續(xù)切片法一般用于淋巴結(jié)的微轉(zhuǎn)移檢測,其檢出率與切片間距有很大關(guān)系。僅切取1～2個(gè)切面的常規(guī)病理切片檢查對淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移灶的檢出率很低，連續(xù)切片可以提高淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的檢出率。據(jù)報(bào)道，對連續(xù)切片進(jìn)行細(xì)致分析，能從常規(guī)病理組織學(xué)檢查陰性的淋巴結(jié)中檢出l0％的微轉(zhuǎn)移［７］。但是連續(xù)切片法需要一個(gè)標(biāo)本切幾十乃至幾百張切片，工作量大，且敏感度低，對未形成轉(zhuǎn)移灶的少量

4、癌細(xì)胞難以檢出，故近年來已很少使用。　免疫組織化學(xué)法　免疫組織化學(xué)法是選用針對腫瘤細(xì)胞特異標(biāo)記物的抗體，用顯色劑標(biāo)記，通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的成色反應(yīng)，尋找組織、血液、淋巴結(jié)、骨髓中的腫瘤細(xì)胞。免疫組織化學(xué)法可以檢測出常規(guī)HE染色不能發(fā)現(xiàn)的小簇癌細(xì)胞，能從105個(gè)細(xì)胞中檢測出1個(gè)癌細(xì)胞，是比較靈敏的方法。Maehara等［８］報(bào)道應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的34例早期胃癌的420枚淋巴結(jié)，發(fā)現(xiàn)其中8例15枚淋巴結(jié)發(fā)生了微轉(zhuǎn)移?！∶庖呓M織化學(xué)法具有簡便、直觀、靈敏度高、結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn)；缺點(diǎn)是需時(shí)較長，

5、費(fèi)用較昂貴，會(huì)因遺漏而出現(xiàn)假陰性，或單抗與基質(zhì)或炎癥細(xì)胞交叉反應(yīng)出現(xiàn)假陽性?！T－PCR　RT－PCR技術(shù)因其高敏感性和特異性被應(yīng)用于腫瘤微轉(zhuǎn)移的檢測，其原理是選擇腫瘤細(xì)胞特異性標(biāo)記基因擴(kuò)增，檢測該基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，判斷是否存在轉(zhuǎn)移的癌細(xì)胞。Mori等［９］應(yīng)用RT-PCR擴(kuò)增CEA檢測胃腸道腫瘤淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移灶的存在情況，發(fā)現(xiàn)此法敏感度為10-4，陽性率由20％提高到60％。RT-PCR所需樣品少，省時(shí)，經(jīng)濟(jì)，是目前認(rèn)為最適于發(fā)現(xiàn)腫瘤早期轉(zhuǎn)移的方法，尤其適用于微量樣本中目的基因的獲取或微量腫瘤細(xì)胞的檢測。本方法尚

6、有不足，如外源基因污染、假基因干擾、RNA的非法轉(zhuǎn)錄可致假陽性，而基因表達(dá)產(chǎn)物變異、取材的局限等可致假陰性。隨著新的腫瘤特異性標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)，反應(yīng)條件的優(yōu)化，RT－PCR有可能成為檢測腫瘤微轉(zhuǎn)移的常規(guī)方法?！「骨粵_洗液的檢測　進(jìn)展期胃癌根治術(shù)后最常見的復(fù)發(fā)為腹膜轉(zhuǎn)移，約占總復(fù)發(fā)的33%～50%，胃癌腹膜轉(zhuǎn)移患者5年生存率在35%以下，是導(dǎo)致患者死亡的主要原因之一［１０］。腹腔內(nèi)脫落的癌細(xì)胞是形成腹腔轉(zhuǎn)移的先決條件和胃癌預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立不良因素［１１］。腹腔沖洗液細(xì)胞學(xué)檢查是檢測ECC的常用方法，成為預(yù)測腹膜微轉(zhuǎn)移的重

7、要手段，但其缺點(diǎn)是對微量癌細(xì)胞檢測敏感性低，陽性率僅為14％～21％，有較高的漏診率［１２-１３］。盛勇等［１4］應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法對30例胃癌患者行腹腔沖洗液CK20和CEA檢測及常規(guī)PLC檢查，結(jié)果顯示免疫細(xì)胞化學(xué)陽性檢出率明顯高于PLC。王劍鋒等［１5］收集43例胃癌和7例胃良性病變患者的術(shù)中腹腔沖洗液，通過RT-PCR測定沖洗液中游離細(xì)胞的CEAmRNA表達(dá)，其陽性率為％，明顯高于PLC，且與胃癌浸潤深度、漿膜受浸潤程度及類型相一致，從而認(rèn)為RT-PCR較PLC檢測腹腔微量游離癌細(xì)胞更有優(yōu)勢，是判斷

8、胃癌有無腹膜微轉(zhuǎn)移的一種較好的方法?！∥赴┪⑥D(zhuǎn)移檢測的常用腫瘤標(biāo)記物　腫瘤標(biāo)記物是指由腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的，能夠反映腫瘤自身存在的某些化學(xué)物質(zhì)。腫瘤標(biāo)記物在正常組織中表達(dá)量甚微,可在腫瘤患者的血液或組織中檢出。CEA、細(xì)胞角蛋白、糖類抗原等是檢測胃癌微轉(zhuǎn)移的常用指標(biāo)。.1　CEA　楊萬勇等［１６］應(yīng)用RT-PCR和ELISA檢測40例胃癌、14例胃炎患者及20例健康成人外周血C