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《鹽澤螺旋藻藻藍(lán)蛋白的分離純化》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)第28卷第4期2009年7月食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)JournalofFoodScienceandBiotechnologyV01．28No．4Jul．2009文章編號：1673-1689(2009)04-0521-04鹽澤螺旋藻藻藍(lán)蛋白的分離純化于光1，馬宇翔2，張成武3，李朝軍¨(1．南京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，江蘇南京210046；2．中國藥科大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇南京210009；3．南京師范大學(xué)江蘇省分子醫(yī)學(xué)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇南京210097)摘要：固體硫酸銨沉淀鹽澤螺旋藻藻膽蛋白，羥基磷灰石(HA)柱分離純化具光敏效應(yīng)
2、的藻藍(lán)蛋白(C—PC)，光譜、電泳鑒定其純度。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明C—PC經(jīng)光敏作用能更有效的抑制腫瘤細(xì)胞的生長。關(guān)鍵詞：鹽澤螺旋藻；藻藍(lán)蛋白；光敏作用；腫瘤細(xì)胞中圖分類號：Q949文獻(xiàn)標(biāo)識碼：AIsolationandPurificationofC。phycocyaninfromSpirulinasubsalsaYUGuan91，MAYu—xian92，ZHANGCheng—WU3，LIChao—jun‘3(1．CollegeofPre-cliniealMedicine，NanjingUniersityofTraditionalChineseM
3、edicine，Nanjing210046，China；2．SchoolofLifeScienceandTechnology。ChinaPharmaceuticalUniversity，Nanjing210009，China；3．Molecular＆MedicalBiotechnologyLaboratory．NanjingNormalUniversity，Nanjing210097，China)Abstract：Inthisstudy，PrecipitatedC—phycocyanin(C—PC)fromSpirulinasubsalsab
4、ysolidammoniumsulphateandchromatographedonahydroxylapatitecolumn；TheisolatedC—phycocyaninthenidentifieditspuritybyspectrumandelectrophoresis．Furthremore，C—PCcouldinhibittumorcellsbyphotosensitizationprominently．Keywords：Spirulinasubsalsa，C—phycocyanin，photosensitization，tum
5、ourcells光動(dòng)力治療是借助于在病灶富集的光敏劑光照下產(chǎn)生自由基和活潑態(tài)氧實(shí)現(xiàn)對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。由于在正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的選擇性上，光動(dòng)力療法更優(yōu)于放疔和化療，所以深受人們重視。藻藍(lán)蛋白有光敏作用，且安全無毒，是一種有潛力的光敏劑，可用于腫瘤的光動(dòng)力治療[卜引。我們以目前國內(nèi)外較少研究的鹽澤螺旋藻為材料，分離純化藻藍(lán)蛋白，通過體外腫瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證鹽澤螺旋藻的藻藍(lán)蛋白是否具有較強(qiáng)的光敏作用，以期為它在腫瘤的光動(dòng)力治療中的應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。l材料與方法1．1實(shí)驗(yàn)材料鹽澤螺旋藻(Spirulinasubsalsa)由以色列本古里昂大學(xué)
6、沙漠研究所微藻生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室提供。生長于Zarrouk培養(yǎng)基中，冷白熒光燈作為光源，光暗周期為14：10，光強(qiáng)為3000lux，在28℃恒溫室通氣培養(yǎng)，一般生長5d后于其對數(shù)生長后期收獲。A375為人的惡性皮膚黑色素瘤細(xì)胞，U251為人的神經(jīng)瘤細(xì)胞，L02為人的肝細(xì)胞，均為作者所收稿日期：2008—05—18作者簡介：于光(1978一)，男，江蘇簿安人，講師，主要從事生化與分子生物學(xué)研究。*通訊作者：李朝軍(1966一)，男，安徽阜陽人，教授，主要從事細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)研究。Email：liehaojun@yahoo．COITI萬方數(shù)據(jù)522食品
7、與生物技術(shù)學(xué)報(bào)第28卷在實(shí)驗(yàn)室購買并保存。1．2試驗(yàn)方法藻藍(lán)蛋白的分離純化對數(shù)期藻體反復(fù)凍融抽提藻膽蛋白，60％(w／v)飽和度的硫酸銨沉淀。沉淀溶于最小體積的1mmol／L的磷酸鹽緩沖液(pH值7．O)中，并透析。經(jīng)羥基磷灰石(HA)柱層析，磷酸鹽緩沖液(pH值7．0)分步洗脫，立即進(jìn)行280am光譜測定，收集峰尖部分[4]。1．3藻藍(lán)蛋白的純度及活性鑒定1。3．1純度鑒定經(jīng)SephadexG-100柱層析和7．5％的PAGE鑒定藻藍(lán)蛋白的純度。1．3．2活性鑒定藻藍(lán)蛋白吸收光譜用日立557紫外可見光掃描儀測定(200～900nm)。室溫?zé)?/p>
8、光光譜用日立MPF一4型熒光分光光度計(jì)測定，激發(fā)波長580nmL5』。1．4藻藍(lán)蛋白亞單位的分離與鑒定若藻藍(lán)蛋白的PAGE電泳為單一條帶，再以12％的SDS—PAG
