神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞瘤分化的研究

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1、神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)神經(jīng)母細(xì)胞瘤分化的研究【摘要】  目的觀察神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤(neuroblastoma,NB)細(xì)胞增殖的抑制和可能的分子機(jī)制及NGF-TrkA信號(hào)傳導(dǎo)途徑在NB細(xì)胞分化中的作用。方法取本院住院患兒新鮮手術(shù)標(biāo)本,進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)作為細(xì)胞模型,通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)拒染法計(jì)數(shù)活細(xì)胞;觀察NGF干預(yù)前后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;MTT法檢測(cè)細(xì)胞的增值活性;RT-PCR分析TrkA表達(dá)情況。結(jié)果NGF作用NB細(xì)胞后,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生顯著變化,并可劑量依賴性的抑制細(xì)胞增殖,2d時(shí)TrkA表達(dá)增加,4d以后出現(xiàn)Trk

2、A表達(dá)的明顯增加。結(jié)論NGF對(duì)NB細(xì)胞體外增殖有抑制作用并誘導(dǎo)其分化,且表現(xiàn)劑量依賴關(guān)系;NGF可誘導(dǎo)NB細(xì)胞分化成熟及TrkAmRNA表達(dá)水平增高,可能是NGF誘導(dǎo)NB細(xì)胞分化逆轉(zhuǎn)的分子生物學(xué)機(jī)制之一?!娟P(guān)鍵詞】神經(jīng)母細(xì)胞瘤神經(jīng)生長(zhǎng)因子細(xì)胞分化【Abstract】ObjectiveToinvestigatethedifferentiationandproliferationofneuroblastoma(NB)cellsinducedbynervegrowthfactor(NGF)anditspossi

3、blemechanisms.MethodsNBtumortissueswerecollectedandprimarycellculturewasperformed.Trypanblueexclusionwasusedtocountthealivecells.Morphologicalchangeswereobservedunderthephase-contrastmicroscope.ThechangeofcellproliferationwasdeterminedbymeansofMTTassay.Tr

4、kAexpressionwasexaminedbyRT-PCRmethod.ResultsByday,thealivecellsofgroupA、BandCdecreasedbytreatmentofNGF;morphologicalchangesofNBcellswerealsoobserved.RT-PCRdetectionshowedthattheTrkAmRNAexpressionincreasedfromdayandreacheditspeakondayinatimeanddosedepende

5、ntmannerbytreatmentofNGF.ConclusionNBcellstreatedbyNGFdifferentiatetoneuron-likecellsandthecellgrowthisinhibitedinadose-dependentmanner.TrkA'sexpressionisincreasedbyNGF.ThismaybeoneofthemechanismsofspontaneousregressionofNB.【Keywords】neuroblastomanervegro

6、wthfactorcelldifferentiation神經(jīng)母細(xì)胞瘤(neuroblastoma,NB)是起源于胚胎期神經(jīng)嵴細(xì)胞的兒童惡性腫瘤,自然退化常見于新生兒、嬰兒和早期腫瘤,而較大兒童晚期患者惡性程度高,預(yù)后差。對(duì)化療耐藥是治療失敗的主要原因[1]。如何應(yīng)用人為方法使NB細(xì)胞分化、逆轉(zhuǎn)、消退,是當(dāng)今腫瘤界研究的熱點(diǎn)問(wèn)題[2],用藥物誘導(dǎo)NB向良性轉(zhuǎn)化可能成為臨床治療的一個(gè)新途徑?!?資料與方法一般資料歲男性患兒,因發(fā)現(xiàn)“腹部腫物”1周,于XX年6月10日入住本院,行腹部B超、CT檢查,考慮為神經(jīng)源

7、性腫瘤;于XX年6月12日行剖腹探查、腹部腫物切除術(shù)。手術(shù)標(biāo)本冰凍切片提示神經(jīng)母細(xì)胞瘤。為Evans分期Ⅲ期,無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,術(shù)后病理診斷:神經(jīng)母細(xì)胞瘤。研究方法(1)試劑:NGF購(gòu)自晶美公司;MTT購(gòu)自華美公司。其它均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?。Trizol購(gòu)自美國(guó)GBICO公司;RT-PCR試劑盒購(gòu)自Promega公司;TaqDNA合成酶、瓊脂粉購(gòu)自上海生工生物工程公司;DNAMarker購(gòu)自寶生物工程大連公司;引物TrkA引物序列根據(jù)Genebank資料設(shè)計(jì)如下:TrkAsense:CTGGGCGGAGTGCCT

8、GAA,antisense:GGCTC-CGGCTCCAGGAA,擴(kuò)增產(chǎn)物為528bp,TrkA引物及β-actin(114bp)內(nèi)參照引物由北京賽百盛公司合成。(2)NB細(xì)胞培養(yǎng):用消化法進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng),培養(yǎng)基為DMEM,含10%胎牛血清、青霉素100U/ml、鏈霉素/ml,在5%CO2、95%空氣環(huán)境中恒溫恒濕孵育。(3)實(shí)驗(yàn)分組:用作生長(zhǎng)及分化研究的NB細(xì)胞分成4組。A組:DMEM培養(yǎng)基加入NGF使終濃度為5μmol/

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