實驗一 顯微鏡的基本知識與使用

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1、實驗一顯微鏡的基本知識及使用方法一、目的要求學習顯微鏡的原理、使用方法和保養(yǎng)。利用顯微鏡觀察微生物標本學習顯微數(shù)碼系統(tǒng)的使用方法。學習生物繪圖。二、實驗程序了解顯微鏡的構(gòu)造、原理利用顯微鏡觀察微生物標本了解顯微數(shù)碼系統(tǒng)的使用方法生物繪圖與拍照三、實驗材料微生物染色裝片標本。顯微鏡、計算機、香柏油、二甲苯或乙醇乙醚混合液、擦鏡紙等。四、實驗步驟（一）了解顯微鏡的構(gòu)造、原理鏈接實驗錄相1、光學部分：接目鏡、接物鏡、照明裝置(聚光鏡、虹彩光圈、反光鏡等)。它使檢視物放大，造成物象。2、機械部分：鏡座、鏡臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺、載物

2、臺轉(zhuǎn)移器、粗調(diào)節(jié)器、細調(diào)節(jié)器等部件。它起著支持、調(diào)節(jié)、固定等作用。顯微鏡的構(gòu)造圖1-2光學顯微鏡的成像原理倒立的虛像工作原理1、放大倍數(shù)=接物鏡放大倍數(shù)×接目鏡放大倍數(shù)2、顯微鏡的分辨率是表示顯微鏡辨析物體（兩端）兩點之間距離的能力，可用公式表示為：D=λ/2n·sin(α/2)式中D：物鏡分辨出物體兩點間的最短距離。?：可見光的波長（平均0.55?m)n:物鏡和被檢標本間介質(zhì)的折射率。?：鏡口角（即入射角）。3、數(shù)值孔徑N.A=n.sin（α/2）①干燥系物鏡?以空氣為介質(zhì)，如常用的40×以下的物鏡，數(shù)值孔徑均小于1。②油浸系物

3、鏡?常以香柏油為介質(zhì)，此物鏡又叫油鏡頭，其放大率為90×—100×，數(shù)值孔值大于1。根據(jù)物鏡放大率的高低，可分為：①低倍物鏡?指1×—6×，NA值為0.04—0.15；②中倍物鏡?指6×—25×，NA值為0.15—0.40；③高倍物鏡?指25×—63×，NA值為0.35—0.95；④油浸物鏡?指90×—100×，NA值為1.25—1.40。油鏡使用的原理增加照明亮度：油鏡，即油浸接物鏡。當光線由反光鏡通過玻片與鏡頭之間的空氣時，由于空氣與玻片的密度不同，使光線受到曲折，發(fā)生散射，降低了視野的照明度。若中間的介質(zhì)是一層油（其折射率與

4、玻片的相近），則幾乎不發(fā)生折射，增加了視野的進光量，從而使物象更加清晰。提高分辨率：香柏油（n=1.515）為介質(zhì)時，其折射率與玻璃相近，光線經(jīng)過載玻片后可直接通過香柏油進入物鏡而不發(fā)生折射，從而增加數(shù)值孔徑達到提高分辨率的目的。（二）了解顯微數(shù)碼系統(tǒng)的使用方法鏈接演示顯微數(shù)碼系統(tǒng)軟件的使用方法演示拍照的方法圖片保存要求建文件夾：D:環(huán)境0511班200522200****圖片：格式：JPG文件名：環(huán)境200522200****大腸桿菌（10×100）（三）利用顯微鏡觀察微生物標本1、觀察前的準備2、低倍鏡觀察3、高倍鏡觀察4、

5、油鏡觀察5、鏡檢完畢后的處理1、觀察前的準備（1）將顯微鏡置于平穩(wěn)的實驗臺上，鏡座距實驗臺邊沿約為3－4cm。檢查零件是否齊全，鏡頭是否清潔。（2）調(diào)節(jié)光亮度（3）調(diào)節(jié)目鏡及數(shù)值孔徑大小鏈接實驗錄相2、低倍鏡觀察將標本片放置在載物臺上，用標本夾夾住，移動推動器，使被觀察的標本處在物鏡正下方。轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)旋鈕，使物鏡調(diào)至接近標本處，用目鏡觀察并同時用粗調(diào)節(jié)旋鈕慢慢下降載物臺，直至物像出現(xiàn)，再用細調(diào)節(jié)旋鈕使物像清晰為止。用推動器移動標本片，找到合適的目的像并將它移到視野中央進行觀察。鏈接實驗錄相3、高倍鏡觀察在低倍物鏡觀察的基礎(chǔ)上轉(zhuǎn)換高

6、倍物鏡。較好的顯微鏡，低倍、高倍鏡頭是同焦的，在正常情況下，高倍物鏡的轉(zhuǎn)換不應(yīng)碰到載玻片或其上的蓋玻片。若使用不同型號的物鏡，在轉(zhuǎn)換物鏡時要從側(cè)面觀察，避免鏡頭與玻片相撞。然后從目鏡觀察，調(diào)節(jié)光照，使亮度適中，緩慢調(diào)節(jié)粗調(diào)節(jié)旋鈕，使載物臺下降，直至物像出現(xiàn)，再用細調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)至物像清晰為止，找到需觀察的部位，并移至視野中央進行觀察。鏈接實驗錄相（1）升高鏡筒，將油鏡轉(zhuǎn)至工作位置。在玻片標本區(qū)域滴加香柏油。（2）從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器慢慢降下鏡筒，使油鏡浸在油中幾乎與裝片接觸，但不可壓及裝片，以免壓碎玻片，損壞鏡頭。（3）將光線調(diào)亮，

7、目鏡觀察，用細調(diào)節(jié)器校正焦距，直至物像看清為止。仔細觀察并繪圖。鏈接實驗錄相4、油鏡觀察5、鏡檢完畢后的處理（1）觀察完畢，下降載物臺，取下載玻片。（2）將油鏡頭轉(zhuǎn)出，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的香柏油，再用擦鏡紙沾少許二甲苯（或乙醚酒精混合液）擦掉殘留的香柏油，最后再用干凈的擦鏡紙擦干殘留的二甲苯（注意向一個方向擦拭）。（3）將各部分還原。轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使物鏡頭不與載物臺通光孔相對，而是成八字形位置，再將鏡筒下降至最低，同時降下聚光器。用柔軟紗布清潔載物臺等機械部分，最后套上鏡罩，置陰涼干燥處存放。鏈接實驗錄相6、結(jié)果報告拍照與提交

8、圖片提交在高倍鏡和油鏡下觀察到的微生物（**菌）形態(tài)圖片，注明總放大倍數(shù)。生物繪圖五、注意事項1、不準擅自拆卸顯微鏡的任何部件,以免損壞。2、鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔度。3、觀察標本時，必須依次用低、中、高倍鏡，最后用油鏡。