癲癇大鼠模型建立與評(píng)價(jià)

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1、癲癇大鼠模型制作概述癲癇的概念、發(fā)病機(jī)制癲癇持續(xù)狀態(tài)氯化鋰-匹羅卡品癲癇模型制備原理氯化鋰-匹羅卡品癲癇模型制作方法不同的癲癇模型制備方法癲癇（epilepsy）是一組由已知或未知病因所引起，腦部神經(jīng)元高度同步化，且常具有自限性的異常放電導(dǎo)致，以反復(fù)發(fā)作性、短暫性、通常為刻板性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能喪失為特征的綜合征。臨床可表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)、感覺、意識(shí)、行為和自主神經(jīng)等不同程度的障礙。發(fā)病機(jī)制1.離子通道學(xué)說各種病因→基因表達(dá)異?！窠?jīng)遞質(zhì)異?！痣x子通道結(jié)構(gòu)和功能異?！x子異常跨膜運(yùn)動(dòng)→神經(jīng)元異常放電→神經(jīng)元間的擴(kuò)布→引

2、起癲癇發(fā)作(1)沉默突觸的激活(2)突觸囊泡的快速回收發(fā)病機(jī)制2.異常網(wǎng)絡(luò)學(xué)說突觸的可塑性：隨著癲癇的反復(fù)發(fā)作，初期可逆性的突觸異常連接逐漸成為固定的新連接——苔蘚纖維“芽生”突觸功能異常：生長錐-整合素系統(tǒng)功能異常（肌動(dòng)蛋白、磷酸化TAU蛋白環(huán)路傳導(dǎo)并放大疾病信號(hào)，改變癇性放電傳播方向，避開了內(nèi)源性抗癲癇系統(tǒng)對(duì)其的抑制作用，導(dǎo)致癲癇反復(fù)發(fā)作）發(fā)病機(jī)制3.腦電圖上癇性放電與臨床發(fā)作異常神經(jīng)元放電進(jìn)入局部神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)→受興奮或抑制神經(jīng)元增益或抑制→異常電流增大或降低異常電流增大至一定程度→腦電圖上的癇性放電電流增加到足以

3、沖破腦的抑制功能，或腦內(nèi)對(duì)其抑制作用減弱時(shí)→臨床上的癲癇發(fā)作發(fā)病機(jī)制現(xiàn)有研究資料支持腦電圖上的癇性放電是以興奮性谷氨酸為代表的腦內(nèi)興奮功能增強(qiáng)的結(jié)果，臨床上的癲癇發(fā)作除興奮功能增強(qiáng)外，還有Γ-氨基丁酸（GABA）為代表的腦內(nèi)抑制功能絕對(duì)或相對(duì)減弱有關(guān)發(fā)病機(jī)制4.不同類型癲癇發(fā)作的可能機(jī)制：異常放電被局限在某一腦區(qū)，臨床上就表現(xiàn)為局灶性發(fā)作癇性放電波及雙側(cè)腦部則出現(xiàn)全面性癲癇異常放電傳到丘腦神經(jīng)元被抑制，則出現(xiàn)失神發(fā)作癲癇的動(dòng)物模型較理想的癲癇模型：應(yīng)具有和人類癲癇相似的發(fā)生、發(fā)展過程。特征：（1）具有諸如神經(jīng)細(xì)胞丟

4、失、膠質(zhì)細(xì)胞增生、軸突絲狀芽生和突觸重建等人類癲癇相似的病理學(xué)基礎(chǔ)；（2）在初始刺激與自發(fā)性癲癇發(fā)作之間有較為固定的潛伏期（數(shù)天至數(shù)周）；（3）模型在一定時(shí)間內(nèi)保持大腦神經(jīng)元興奮性持續(xù)增高。癲癇持續(xù)狀態(tài)（SE）大鼠模型癲癇持續(xù)狀態(tài)（statusepilepticus,SE）是指一次癲癇發(fā)作持續(xù)30分鐘以上，或連續(xù)多次發(fā)作、發(fā)作間期意識(shí)或神經(jīng)功能未恢復(fù)至通常水平。任何類型癲癇均可出現(xiàn)癲癇持續(xù)狀態(tài)，但通常是指全面強(qiáng)直—陣攣發(fā)作持續(xù)狀態(tài)。Lithium-Pilocarpine模型：Lithium-Pilocarpine模

5、型發(fā)生發(fā)展過程與人類顳葉癲癇高度相似，具有相同的病理學(xué)基礎(chǔ)，近年來一直被認(rèn)為是研究顳葉癲癇的理想模型。目前尚未清楚。主要是通過激動(dòng)乙酰膽堿受體來實(shí)現(xiàn)，匹羅卡品注射后，激發(fā)了腦內(nèi)乙酰膽堿能受體，對(duì)腦膽堿能M受體的刺激可引起持續(xù)性的全身強(qiáng)直-陣攣發(fā)作。腦膽堿能M受體同G蛋白耦聯(lián)，G蛋白將受體的刺激信號(hào)傳遞給磷脂酶C，磷脂酶C水解膜磷脂4,5二磷酸-磷脂酰肌醇，使其分解為兩種第二信使三磷酸肌醇（IP3）和二脂酰甘油（DG），這兩種物質(zhì)可刺激神經(jīng)元。亦有研究提示，匹羅卡品亦激活了NMDA受體、代謝性谷氨酸受體，導(dǎo)致了腦內(nèi)興

6、奮性系統(tǒng)激活，出現(xiàn)癲癇發(fā)作。匹羅卡品致癲癇持續(xù)狀態(tài)模型的機(jī)制：通過抑制肌醇單磷酸酶來阻斷磷酸-磷脂酰肌醇循環(huán)中IP3酶解成肌醇，導(dǎo)致循環(huán)降解產(chǎn)物第二信使IP3和DG可利用度降低及腦內(nèi)肌醇水平的降低，這與匹羅卡品的作用相協(xié)同，可減少匹羅卡品的用量，降低致癇動(dòng)物的死亡率。氯化鋰的作用機(jī)制：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康成年SD大鼠，在室溫、自然光環(huán)境下給予充足的食物和水，自然夜晝循環(huán)。實(shí)驗(yàn)藥品：氯化鋰、匹羅卡品、丁溴東莨菪堿實(shí)驗(yàn)方案：取健康成年SD大鼠，給予氯化鋰(127mg/kg)腹腔注射，24小時(shí)后，腹腔注射M膽堿受體阻滯劑丁溴東

7、莨菪堿(1mg/kg)，30min后腹腔注射1%的匹羅卡品（30mg/kg）；觀察大鼠的行為表現(xiàn)。模型制作方法模型制作方法觀察大鼠發(fā)作情況，根據(jù)Racine分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，若無發(fā)作或發(fā)作未達(dá)到Ⅳ級(jí),則每隔30min腹腔注射PILO10mg/（kg·次),直至出現(xiàn)癲癇持續(xù)狀態(tài)為止。達(dá)到Ⅳ—Ⅴ級(jí)發(fā)作，持續(xù)30min以上可認(rèn)為是癲持續(xù)狀態(tài),Ⅳ級(jí)以上發(fā)作并存活者可作為成功的癲癇持續(xù)狀態(tài)模型。Racine分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)大鼠癲癇發(fā)作癥狀采用Racine分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)：無抽搐發(fā)作Ⅰ級(jí)：面部抽搐和孤立性肌陣攣Ⅱ級(jí)：全身性陣攣抽搐Ⅲ級(jí)：全身性陣

8、攣抽搐，伴站立Ⅳ級(jí)：全身性強(qiáng)直-陣攣抽搐，伴站立和跌倒Ⅴ級(jí)：反復(fù)的Ⅳ級(jí)發(fā)作呈SE或抽搐致死Lithium-Pilocarpine模型優(yōu)點(diǎn)1.有效致癇劑量與致死劑量之間跨度大，安全性好2.致癇過程清晰，伴隨出現(xiàn)的生物行為改變具有特異性3.自發(fā)性癇性發(fā)作持續(xù)時(shí)間較長，邊緣葉神經(jīng)病理損害輕而齒狀回外層顆粒細(xì)胞軸突發(fā)芽現(xiàn)象明顯4.致癇鼠生存率高其他常見的癲癇發(fā)作類型