資源描述：
《分子生物學方法在食品微生物檢測中的應用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、分子生物學方法在食品微生物檢測中的應用黑龍江省盤tSi藥tSi檢驗檢測所150000摘要：今年來，由致病微生物污染引發(fā)的食品安全事故逐年上升，傳統(tǒng)微生物檢測手段存在檢測周期長、特異性差等缺點，因此建立快速、高特異性的致病菌檢測手段具有重要意義，木文主要闡述幾種基于分子生物學的鑒定方法在食品中致病微牛.物檢測中的應用。關鍵詞：食rKj微生物檢測；基因探針；PCR技術致病性微牛.物引起的食源性疾病是全世界頭號食品安全問題，分子牛.物學技術能夠快速、準確的檢測出引起人類疾病和食物中毒的致病性微牛.物,木篇文章主要對相關檢查手段在微生物檢測中如何使用做出研宄。1、基
2、因探針檢測方法基因探針技術乂可以叫做是核酸分子雜交手段，該技術在很早以前就已經(jīng)發(fā)明出來，并且和某些科學家一起創(chuàng)建。它在DNA分析方法中起到了鋪墊的作用，也是在相關領域得到普遍認可的一種技術?；蛱结樖且环N擁有標記的相關特異片段?；蛱结槞z測這種技術是通過相應的配對所產(chǎn)生的原理，讓適量的核酸單鏈采取退火的形式而逐漸的變成雙鏈。在最近幾年里，該技術在相關領域得到了普遍的認可，可以及時的對出現(xiàn)的病性微牛.物進行準確的檢測，不會對非治病性有關的微牛.物帶來干擾。不管哪種病原體都會具有一定的核算片段，相關人員將病原體采取分離或者是標記的形式就能夠制作出探針，采取帶有標
3、記物的相關探針，就能夠和相應的樣品做好雜交工作，倘若樣品中存在某種特定的病原體，那么相關人員就應當將探針和相關的核酸序列進行有效的結合，從而利用特殊的方式來對標記物進行測定，就可以準確的了解到病原體是否存在特定性。該技術手段不但具有一定的靈敏性，而且還能夠起到定外的作用，該技術在致病性原菌中會得到廣泛的使用。當前，不管是國內研究人員還是國外研究人員己經(jīng)發(fā)明出許多技術手段來應用到食品檢測中，蘇中奮關研究人員通過采取沙門菌基因片段當做探針的形式，來對沙門菌做出了檢測工作，取得了顯著的效果。還冇一些研究人員通過利用非放射性DNA探針手段，能夠很快的對相應的增生李斯
4、特菌做出奮效的檢查；還有利用rp—z探針的技術手段，對大腸桿菌做出了準確的檢查。除此之外，已經(jīng)冇許多基因探針試劑盒生產(chǎn)出來。在某國家的公司中己經(jīng)成功的發(fā)明了脫氧核糖核酸雜交篩選比色的這種形式，是通過奮關的基因探針來對rRNA做出的詳細檢測，具體檢測步驟體現(xiàn)在以下幾點：基因探針這種技術方式在有關學術中得到了普遍的認可，該技術可以理解為是對特異RNA等進行監(jiān)測的工具，還可以對任何一種微生物做出準確的檢測。因此，該技術在食品生物中能夠發(fā)揮出自身的作用。在很久以前，某國家己經(jīng)成功的對探針雜交技術得到了有關批準，可以對人腸桿菌的數(shù)量進行準確的監(jiān)測。但是，基因探針檢測技
5、術仍存在放射性同位素標記的核酸探針成本高、對人體危害性大、反應廢棄物難以處理及操作步驟繁瑣等問題，這極人地限制了其商品化應用。因此，完善非放射性標記探針，擴增及放大靶序列和探針的信號，發(fā)展簡單的雜交方式使探針檢測方法更加快速、簡單、低廉，是下一步發(fā)展的方向。2、PCR技術實吋定量PCR技術是近年發(fā)展起來的新型技術，該技術通過直接測定PCR過程中熒光信號的變化，利用電腦分析軟件對PCR過程中產(chǎn)生的擴增產(chǎn)物進行動態(tài)監(jiān)測和自動定量，從而成功地實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍。而且，使用實吋定量PCR技術不需要進行凝膠電泳，避免了交叉污染，使反應具有更強的特異性和更高
6、的自動化程度。RudiK等［12］采用實時定量PCR技術，快速地檢測出了食品樣品中的單核細胞增多性李斯特菌。Berrada等［13］也采用該技術檢測出了色拉中的李斯特菌。隨著分子生物學技術的不斷發(fā)展，多重PCR、標記PCR和不對稱PCR等多種不同的PCR方法都被應用于食品病原微生物的檢測中，它們的應用使PCR技術擁有了更高的靈敏度和更短的周期。但普通PCR技術在檢測中會受到模板制備、引物質量與特異性、酶的質量及PCR循環(huán)數(shù)等因素的影響，實時熒光定量PCR技術在檢測過程中會受到同異源DNA背景、寡核苷酸雜交特異性、TaqMan探針比例、SYBRGreenI濃度
7、大等因素影響，可造成定量結果出現(xiàn)偏差或導致出現(xiàn)假陽性和假陰性結果。因此，在實際應用中應盡量保證上述因素的穩(wěn)定性，并設置陽性對照，以盡力避免錯誤結果的出現(xiàn)。3、基因芯片技術基因芯片技術是采用原位合成或顯微打印手段，將數(shù)以萬計的核酸探針固化于支持物表面，與標記的樣品進行雜交，通過檢測雜交信號來實現(xiàn)對樣品的快速檢測?；蛐酒夹g是基于芯片上的探針與樣品中的靶基因片段之間發(fā)生的特異性核酸雜交。其主要步驟如下：將各種基因寡核苻酸點樣于芯片表面，微生物樣品經(jīng)處理后進行核酸提取和核酸擴增，再用熒光素對其進行標記，然后與芯片上的寡核苻酸點雜交，最后通過掃描儀定量和分析熒光分
8、布模式來確定檢測樣品是否存在某些特定微生物。基因芯片
