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1、大蒜素對金黃色葡萄球菌抗菌作用刁玉蘭1黃勇2(1廣東省陽東縣人民醫(yī)院檢驗科529500;2廣東省陽江監(jiān)獄醫(yī)院529535)【摘要】探討大蒜素對金黃色葡萄球菌的抗菌作用。以大蒜素和羅紅霉素、萬古霉素，頭孢他啶、頭孢拉定對112株金黃色葡萄球菌體外藥敏實驗。結(jié)果：大蒜素對金黃色葡萄球菌的抗菌作用很明顯,金黃色葡萄球菌對大蒜素提取物的耐藥率較低。大蒜素提取物對金黃色葡萄球菌生長有強力抑制作用?！娟P(guān)鍵詞】大蒜素金黃色葡萄球菌抗菌作用【中圖分類號】R96【文獻標識碼】A【文章編號】2095-1752(2014)11-0259-02大蒜素(allicin
2、),化學名為二烯丙基三硫化物，其結(jié)構(gòu)式為CH2=CH-CH2-S-S-S-CH2-CH=CH2,是大蒜的主要有效成分。大蒜素具有廣泛的藥理活性，抗菌譜廣,對革蘭氏陽性菌,革蘭氏陰性菌，真菌都兵有較好的抑制作用。近年來，耐藥金黃色葡萄球菌的發(fā)病率隨著廣譜抗生素和免疫抑制劑的應(yīng)用呈逐年上升態(tài)勢,常用的抗菌藥物普遍存在有較大的毒副作用，長期使用可產(chǎn)生耐藥性。木實驗中檢測了大蒜素對金黃色葡萄球菌體外抑菌作用，旨在尋找治療日益增多的金黃色葡萄球菌感染性疾病的新途徑。1材料與方法1.1材料1.1.1受試菌株112株金黃色葡萄球菌為2009年1月至2013
3、年12月間分離自我院臨床各科送檢標木，按《全岡臨床檢驗操作規(guī)程》鑒定。金黃色葡萄球菌JCIA為廣東省臨床檢驗中心發(fā)放菌株。在血液培養(yǎng)基中,37°C培養(yǎng)24h菌落；取酵母型培養(yǎng)物,以無菌生理鹽水洗下菌苔,PBS洗滌2次后，以RPMI1640制成一定濃度的菌懸液備用。1.1.2藥物大蒜素由山東魯抗晨欣藥業(yè)奮限公司提供，羅紅霉素、頭孢他啶、頭孢拉定，萬古霉素由珠海迪爾公司提供。1.2方法按NCCLS[1]方案進行，稍加修改即各受試金黃色葡萄球菌株在血液培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)種2次，以確保其生長純度和活力。經(jīng)24h培養(yǎng)后選擇生長較好的菌落,以無菌生理鹽水制成菌懸
4、液。接種吋以RPMI1640培養(yǎng)液將其稀釋成(0.5?2.5)×103cfu/mL。用RPMI1640培養(yǎng)液倍比稀釋各種藥槪于96孔培養(yǎng)板上每行1?10列孔內(nèi)加入系列稀釋藥液lOO&mu上冋時做3行復(fù)孔。藥物的最終作用濃度分別為大蒜素2?1024μg/mL、羅紅霉素2?1024μg/mL、萬古霉素2?1024μg/mL、頭孢他陡1?512μg/mL和頭孢拉定2?1024μg/mL。第11孔為陰性對照;12孔為陽性對照。加入己制備好的金黃色葡萄球菌懸液100μL于各孔中，陰性對照孔不加。再于各孔中
5、加入10μL指示劑(alamarblue),各孔變?yōu)樗{色。經(jīng)35°C48h培養(yǎng)后觀察結(jié)果，冇念珠菌生長的孔由藍色變?yōu)樽霞t色或亮紅色;陰性對照孔全部保持藍色不變，陽性對照孔全部變?yōu)榱良t色結(jié)果才有意義。以剛變色的前一孔的濃度為MIC值。2結(jié)果大蒜素和4種常用抗菌藥物對金黃色葡萄球菌標準株」CIA和112株臨床分離株的體外抗菌效果見表1、2。標準菌株KIA的MIC結(jié)果表明大蒜素對金黃色葡萄球菌的抗菌作用相當于頭孢他啶，略低于萬古霉素;臨床分離株對羅紅霉素和頭孢他啶的耐藥率很高，對大蒜素提取物的耐藥率較低。表1112株臨床分離金黃色葡萄球菌對5
6、種藥物的耐藥情況3討論金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在，空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到。美國疾病控制中心報告，由金黃色葡萄球菌引起的感染占第二位,僅次于大腸桿菌。大蒜素化學名為二烯丙三硫化物,是從大蒜揮發(fā)汕中分離出的化合物。國內(nèi)外學者對大蒜的化學、藥理、臨床方面進行了多方面的研究及實踐,證明人蒜素具冇卓越的解毒、抗菌、抗病毒、降血脂、降血糖、抗腫瘤、提高機體免疫功能等功效，且副作用輕微［2,3］。金黃色葡萄球菌感染的治療成為臨床各科關(guān)注的熱點,0前常用的抗菌藥物有頭孢類、大環(huán)內(nèi)酯類等，普遍存在有較大的耐藥作用。目前萬古霉素保持其較
7、高的抗菌活性，故仍然是許多嚴重金黃色葡萄球菌感染的首選藥物，但是其嚴重的副作用又限制了它的使用。頭孢他啶的抗菌譜較窄，它多用于耐藥球菌的治療，難治性金黃色葡萄球菌感染。實驗中112株臨床分離念珠菌亦顯示了對萬古霉素的敏感性，但對頭孢拉定和羅紅霉素較低。因此天然藥物的篩選成為尋找新型抗菌藥物的新思路。大蒜素抗細菌的原理在于大蒜素分子中的氧原子與細菌生長繁殖所必需的半胱氨酸分子中的巰基相結(jié)合，或使巰基酶失活而抑制其生長和繁殖、脫氫酶、硫氧還原蛋白還原酶、RNA聚合酶等影響半胱氨酸蛋白酶活性，大蒜素與這些酶上面的巰基結(jié)合而抑制細菌活性;大蒜素即使在
8、亞抑制濃度下也能氧化硫氫基團，干擾細胞內(nèi)電子通過二硫氫基降解酶的傳遞反應(yīng)而導(dǎo)致細胞休眠或死亡［4,5］。本實驗結(jié)果亦顯示人蒜素對臨床常見的病原菌一金黃色葡萄球菌具有
