實驗二：淀粉酶活性測定實驗報告

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1、實驗二：淀粉酶活性測定實驗報告淀粉酶活性的測定一、實驗目的酶的活力是酶的重要參數(shù)，反映的是酶的催化能力，因此測定酶活力是研宄酶的基礎(chǔ)。酶活力由酶活力單位表征，通過計算適宜條件下一定時間內(nèi)一定量的酶催化生成產(chǎn)物的量得到。淀粉酶是水解淀粉的糖苷鍵的一類酶的總稱。a-淀粉酶是一種典型的內(nèi)切型淀粉酶，主要作用于淀粉水解的液化階段，因此又叫液化酶。作為一種最重耍的工業(yè)酶制劑，a-淀粉酶廣泛存在子動物，植物和微生物屮。其中，微生物a-淀粉酶以其經(jīng)濟易得成為工業(yè)生產(chǎn)主要來源。目前，關(guān)于a-淀粉酶活性的測定方法很

2、多種。本實驗采用楊氏改良法測定a-淀粉酶；掌握測定ci-淀粉酶活性大小與溫度關(guān)系的方法，通過分析得出酶的最適溫度范圍。、實驗原理酶促反應中，反應速度達到最大值時的溫度和pH值稱為某種酶作用時的最適溫度和pH值。溫度對酶反應的影響是雙重的：一方面隨著溫度的增加，反應速度也增加，直至最大反應速度為止；另一方面隨著溫度的不斷升高，而使酶逐步變性從而使反應速度降低，其變化趨勢呈鐘形曲線變化。不同菌株產(chǎn)生的酶在耐熱性、酶促反應的最適溫度、PH、對淀粉的水解程度，以及產(chǎn)物的性質(zhì)等均有差異。a-淀粉酶屬水解酶，

3、作為生物催化劑可隨機作用于直鏈淀粉分子內(nèi)部的a-1,4糖苷鍵，迅速地將直鏈淀粉分子切割為短鏈的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降，淀粉與碘的反應逐漸消失，這種作用稱為液化作用，生產(chǎn)上又稱a-淀粉酶為液化淀粉酶。a-淀粉酶不能水解淀粉支鏈的a-1,6糖苷鍵，因此最終水解產(chǎn)物是麥芽糖、葡萄糖和a-1,6鍵的寡糖。本實驗通過淀粉遇碘顯藍色，淀粉含量越高，顏色越深。用分管光度計檢測顯色效應大小，通過分管光度值計算酶活力注意：實驗中為了消除非酶促反應引起的淀粉水解帶來的誤差，每組實驗都做了相應的對照實驗，在最

4、終計算酶的活性時以測量組的值減去對照組的值加以校正。在實驗中要嚴格控制溫度及時間，以減小誤差。并且在酶的作用過程中，三支測定管及空白管不要混淆。三、材料、試劑與儀器實驗材料：a-淀粉酶儀器：分光光度計、電熱恒溫水浴鍋、小臺秤、研缽、玻璃儀器若干試劑：①0.4MNaOH/0.4MCH3C00H及0.1MHCI：②0.005%工作碘液:0.5克12和5.0克KI水中研磨，定容至1000mL；③1%糊化淀粉溶液：稱取1.0克淀粉，加入25mL0.4MNaOH,60°C5min,冷卻后加25mL0.4MC

5、H3COOH,定容至100mL；①稀釋a-淀粉酶溶液：待測樣品四、實驗步驟①lOmLl%淀粉溶液加入試管屮，室溫25/45/65°C保溫lOmin②于每管中各加酶稀釋液lmL，在室溫25/45/65DC恒溫水浴中（水浴溫度的變化不應超過±0.5°C）準確加熱lOmin，冷卻。③加ImLIM鹽酸終止反應。②取上述混合液ImL加入預先裝好10mL工作腆液的試管，搖勻。③660nm測吸光度（蒸餾水調(diào)零），記錄數(shù)據(jù)。（注：吸光度測定勿漏空白對照組）對照組為不加酶液，加相應體積的水五、數(shù)據(jù)整理及計算根據(jù)以上

6、的數(shù)據(jù)整理的結(jié)果，結(jié)合以下公式計算兩種淀粉酶的活性:酶活=[（DO-D）*1OO/DO*1O]*稀釋倍數(shù)D—反應混合液吸光度DO—對照組吸光度100—系數(shù)（％）10—反應時間酶活定義：1克a-徙粉酶單位相當于在pH5.0,溫度25、45、65°C,1min將濃度為1%的淀粉溶液的顯藍強度降低1%時所需酶量。