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《丙型肝炎病毒感染的抗體應(yīng)答課件》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、丙型肝炎病毒感染的抗體應(yīng)答及其免疫測(cè)定衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心李金明?丙型肝炎病毒(HepatitisCvirus,HCV)是輸血后肝炎的主要病原；目前的檢測(cè)手段主要是采用ELISA方法檢測(cè)獻(xiàn)血員血中的抗HCV抗體；HCV感染者血循環(huán)中存在針對(duì)HCV不同蛋白的抗體，且具體針對(duì)某種蛋白的抗是否出現(xiàn)、出現(xiàn)的時(shí)間、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)度均有所差異，因此，ELISA測(cè)定時(shí)所使用的包被抗原必須全面，才能有效地檢出所存在抗體；但在實(shí)際工作中，由于不同的抗HCVELISA試劑盒生產(chǎn)廠家所使用HCV抗原的來(lái)源、質(zhì)量及包被濃度各有差異，使得
2、在測(cè)定中對(duì)同一份樣本所測(cè)定的結(jié)果有時(shí)會(huì)出現(xiàn)很大的差異，尤其是對(duì)較弱陽(yáng)性的樣本或僅出現(xiàn)針對(duì)HCV單個(gè)蛋白成份的抗體的樣本。丙型肝炎病毒的分子生物學(xué)HCV為一有包膜呈球形的正單鏈RNA病毒;HCV的基因組全長(zhǎng)約9.4kb，由一過(guò)長(zhǎng)的5’非編碼區(qū)（5’-noncodingregion,5’NCR）、大的約9033個(gè)核苷酸（nt）開(kāi)放讀碼框架(openreadingframe,ORF)和一含poly（A）或poly（U）的3’非編碼區(qū)（3’NCR）尾部三部份組成(圖1)丙型肝炎病毒的分子生物學(xué)丙型肝炎病毒的分子生物
3、學(xué)通常采用基因工程方法，表達(dá)上述結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)區(qū)蛋白作為包被抗原來(lái)建立抗HCV檢測(cè)的ELISA方法。HCV的5’NCR的保守性最好，故RT－PCR檢測(cè)HCVRNA的引物設(shè)計(jì)多選用該區(qū)域。丙型肝炎病毒的分子生物學(xué)HCV為一具有很高變異率的不均一病毒株。其在復(fù)制過(guò)程中所依賴的RNA聚合酶為一容易產(chǎn)生錯(cuò)配傾向（error-prone）的RNA依賴的RNA聚合酶。同許多其它RNA病毒一樣缺乏修補(bǔ)機(jī)制，使得不精確復(fù)制產(chǎn)物不能得到修補(bǔ)，從而出現(xiàn)較多的錯(cuò)配，表現(xiàn)出較高的變異率。多次復(fù)制和變異的結(jié)果將導(dǎo)致多種不同變異株的產(chǎn)生
4、，表現(xiàn)為HCV株間的不均一性或差異性。丙型肝炎病毒的分子生物學(xué)JensBukh對(duì)所有的HCV序列比較和分析后認(rèn)為：（1）HCV至少可分為9個(gè)主要基因型和30多個(gè)基因亞型；（2）各基因型間核酸水平的同源性為65.7%～68.9%，各亞型間為76.9%～80.1%，同亞型間為90.8%～99.0%，符合基因分型原則；（3）已證實(shí)采用部份基因組區(qū)段和全基因組序列進(jìn)行基因分型具有很好的一致性，但除E1和NS5b外，其它各區(qū)的代表性并不完全，因此建議E1和NS5b是將來(lái)進(jìn)一步基因分型的最好選擇片段；（4）在眾多的基因
5、分型方法中，均各有其優(yōu)缺點(diǎn)，唯一可信而又可用于鑒定新的基因型的方法，就是選擇特定的HCV基因區(qū)段特別是E1區(qū)進(jìn)行測(cè)序分析。丙型肝炎病毒的分子生物學(xué)HCV基因型的分布有明顯的地區(qū)差異。1型和2型呈廣泛分布，1a和1b是北美、南美和歐州的主要株型，而1b是大多數(shù)亞州國(guó)家的主要株型；3型主要分布尼泊爾、泰國(guó)、英國(guó)、澳大利亞、芬蘭及新西蘭等國(guó)；4型是中北非州國(guó)家的主要株型；5型則是南非國(guó)家的主要株型；6型在香港和越南占重要比例；7、8、9型均從越南病例中發(fā)現(xiàn)。在我國(guó)以1b和2a為主要株型，其它基因型少見(jiàn)。HCV感染
6、的免疫應(yīng)答的特點(diǎn)（1）HCV作為單鏈RNA病毒，復(fù)制活性較低，感染過(guò)程中誘生α、β干擾素的能力弱于雙鏈RNA病毒；（2）HCV的變異主要在包膜蛋白編碼區(qū)，機(jī)體的免疫作用可加速這種選擇性變異并很快在受染者體內(nèi)出現(xiàn)準(zhǔn)種及主要株型的轉(zhuǎn)換，表現(xiàn)出多相免疫應(yīng)答反應(yīng)；（3）由于HCV核酸具有感染性，因此可阻止病毒在細(xì)胞間傳播的抗體、干擾素對(duì)HCV核酸來(lái)說(shuō)將無(wú)能為力；（4）HCV在感染者體內(nèi)滴度較低，雖然能誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的產(chǎn)生，但在多數(shù)情況下可能不足以誘導(dǎo)有效的病毒清除反應(yīng)。機(jī)體對(duì)HCV感染的抗體應(yīng)答對(duì)非結(jié)構(gòu)蛋白的抗體應(yīng)答
7、對(duì)衣殼蛋白的抗體應(yīng)答對(duì)包膜蛋白的抗體應(yīng)答（一般認(rèn)為C區(qū)和NS4區(qū)蛋白能誘導(dǎo)機(jī)體較強(qiáng)的抗體應(yīng)答）對(duì)HCV非結(jié)構(gòu)蛋白的抗體應(yīng)答（1）HCV的非結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)的產(chǎn)物NS2、NS3、NS4和NS5四種蛋白，除NS2外其它均能有效地誘導(dǎo)HCV感染者的抗體應(yīng)答。抗NS3抗體的出現(xiàn)明顯早于其它抗體，與抗NS4和NS5抗體不同的是，其可能是構(gòu)象依賴性的，因?yàn)槭褂肗S3的合成多肽不能檢出相應(yīng)的特異性抗體。而NS4區(qū)則含有至少兩個(gè)免疫優(yōu)勢(shì)序列位點(diǎn)，抗原性較強(qiáng)，絕大多數(shù)HCV感染者能產(chǎn)生針對(duì)該區(qū)C100－3的抗體反應(yīng)。對(duì)HCV非
8、結(jié)構(gòu)蛋白的抗體應(yīng)答（2）當(dāng)HCV感染者抗NS3和抗NS4抗體陰性時(shí)，針對(duì)NS5區(qū)病毒RNA聚合酶的抗體反應(yīng)可為陽(yáng)性，并且其血清轉(zhuǎn)換要早于其它抗原。在慢性HCV感染者中有79％的病人出現(xiàn)對(duì)該區(qū)的抗體反應(yīng)。由于NS5區(qū)的這些抗體應(yīng)答特征，它已被用于第三代ELISAHCV診斷試劑中，試圖增加診斷的敏感性和特異性。由于非結(jié)構(gòu)蛋白均在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生，在細(xì)胞內(nèi)即完成其生物學(xué)功能。因此，機(jī)體對(duì)這些蛋白產(chǎn)生的抗體無(wú)保護(hù)作用，除了作為
