毛細(xì)管電泳原理

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1、第二章毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜電解質(zhì)中加入表面活性劑(surfactant，例如SDS)，使之形成膠束（Micelle），樣品根據(jù)其疏水性(Hydrophobicity)強(qiáng)弱的差異，在膠束與電解質(zhì)的分配系數(shù)有所不同來進(jìn)行分離，樣品疏水性愈強(qiáng)，則進(jìn)入膠束的機(jī)會(huì)愈大。通常物質(zhì)進(jìn)入膠束后，泳動(dòng)的速度會(huì)變慢，因此疏水性愈強(qiáng)的物質(zhì)則愈慢出來。毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜原理SDS-+EOFMicellarElectrokineticChromatography(MEKC)七種青霉素的分離CZE:20mMPi-Borate,pH8.5(B)MEKC:0.1MSDSin

2、(A)soln.膠束電動(dòng)色譜的特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)增加對(duì)弱極性物質(zhì)分離的分離度在中藥分析、天然產(chǎn)物分析、農(nóng)藥分析中經(jīng)常使用缺點(diǎn)穩(wěn)定性不佳，達(dá)到好的重復(fù)性比較困難第三章毛細(xì)管凝膠電泳毛細(xì)管內(nèi)先填充凝膠(例如polyacrylamide或cellulose)，此時(shí)凝膠會(huì)在毛細(xì)管內(nèi)形成分子篩，樣品依分子量的大小在毛細(xì)管內(nèi)移動(dòng)速度不同而進(jìn)行分離。主要用于核酸片斷及蛋白分子量分析毛細(xì)管凝膠電泳CE雙鏈及單鏈核酸分析45-寡核苷酸質(zhì)控1.02.03.0123456789101112131415161718192023242526272829303031323334

3、IS2110.015.0RelativeFluorescenceIntensitydsDNA片段(72bp-12Kbp)CE-SDS蛋白分子量分析第四章毛細(xì)管等電聚焦第五章親和毛細(xì)管電泳-分離條件基于CZE當(dāng)在CZE樣品或緩沖液中引入抗原或抗體時(shí)，便可以用于研究和分析抗體或抗原，也可以利用這種方法對(duì)電泳峰進(jìn)行特異性定性。顯然除抗原與抗體的選擇需要應(yīng)用生化知識(shí)外，其他方面的選擇與CZE等相同。用于研究分子間相互作用測定，分子構(gòu)型變化特定物質(zhì)檢測活性物質(zhì)篩選ACE測定分子間結(jié)合常數(shù)與解離速率JAK2與SH2-B之間的相互作用研究CE藥物篩選AC

4、E用于相互作用篩選適體Aptamer類似于抗體，但可以體外合成，結(jié)合常數(shù)比抗體更高，有廣泛的藥物篩選和臨床診斷應(yīng)用潛力目前已有以下的一些蛋白的aptamer是采用CE方法篩選得到的IgEHIVtype1reversetranscriptaseThrombinAnti-thrombinIIITaqDNApolymeraseACE用于相互作用篩選傳統(tǒng)篩選方法如親和色譜或者CEC篩選一個(gè)Aptamer需要4-6周而CE只需要幾天就可以了，大大提高了篩選速度--MicroScaleBioseparations2006第六章檢測器選擇小分子檢測大分子

5、檢測CE檢測器種類及性能小分子檢測有紫外吸收首先選擇二極管陣列檢測器或紫外檢測器無紫外吸收可以衍生化的，可以采用自外衍生的方法再用紫外檢測器檢測，如氨基酸、還原性糖等不可以衍生化的，可采用間接紫外法用紫外檢測器檢測，也可以嘗試電化學(xué)檢測器有熒光或需要高靈敏度檢測的可采用LIF檢測器需要測定結(jié)構(gòu)或者難以用光學(xué)檢測器檢測的，可以考慮質(zhì)譜檢測大分子檢測蛋白、核酸可以首先選擇紫外檢測器如果需要高靈敏度檢測可以采用柱前或者柱上衍生的方法標(biāo)記熒光，然后用LIF檢測如果需要特異性檢測，可使用特異性熒光探針，標(biāo)記后再LIF檢測需要測定分子量或氨基酸序列，可

6、采用質(zhì)譜檢測多糖含量較高的多糖可以采用末端吸收法以紫外檢測器檢測含量較低的還原性多糖可用衍生試劑標(biāo)記后以LIF、UV的方式檢測第七章分離條件選擇流程分離條件的選擇是毛細(xì)管電泳中最重要但也是最難之處。不同的專業(yè)研究工作者可能會(huì)有各自不同的選擇策略和流程，我們提出如下九步選擇流程，僅供參考：第一步，盡可能多地了解分離樣品的類型、來源、組成及其性質(zhì)；第二步，根據(jù)樣品的可能性質(zhì)和來源，選擇分離模式，若無樣品信息可先選CZE；條件選擇流程第三步，根據(jù)樣品性質(zhì)確定檢測方法，一般先選直接紫外吸收；第四步，確定樣品處理方式，包括衍生方案以及離心過濾除蛋白等

7、；第五步，根據(jù)樣品解離常數(shù)計(jì)算最佳pH，或利用75μmID毛細(xì)管和磷酸緩沖體系確定pH范圍;條件選擇流程第六步，根據(jù)所需pH構(gòu)建緩沖體系，包括進(jìn)一步優(yōu)化pH、緩沖試劑濃度等；第七步，優(yōu)化其他操作參數(shù)，如毛細(xì)管尺寸、分離電壓和溫度等；第八步，確定是否需要使用添加劑和使用非水溶劑；第九步，確定是否需要換用其他分離模式。