資源描述：
《中國特有植物羊躑躅遺傳多樣性issr分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、摘要從5個天然居群(金溪、廬山、井岡山、武寧和瑞昌)采集羊躑躅樣品，用改良的2×CTAB法從樣品葉片中提取基因組DNA，優(yōu)化了PCR循環(huán)參數(shù)，建立了ISSR—PCR擴(kuò)增的最佳反應(yīng)體系，從167條隨機(jī)引物中篩選出多態(tài)性好且清晰度高的引物，并用篩選出的引物對39個羊躑躅個體的基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，對羊躑躅居群的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究。實驗結(jié)果表明用丙酮對樣品進(jìn)行預(yù)處理可以提高產(chǎn)物的純度。ISSR—PCR擴(kuò)增條件經(jīng)過優(yōu)化后確定為在25ul的ISSRPCR反應(yīng)體系中，各項因子最適條件為：模板DNA30～45ng／25ul，Mg”2．0--2．5mmol／]，dNTPsO．1～O．15mm
2、ol／1，引物0．3～O．41-tmol／1，Taq酶O．5～1．OU：10×PCRbuffer2．5ul，加ddHz0至25ul。其熱循環(huán)參數(shù)為：94℃預(yù)變性5min，之后進(jìn)行30個循環(huán)(94℃imin，55℃30s，72。C2mir1)，最后72℃延伸7min后在4℃終止反應(yīng)。本研究對167條ISSR引物進(jìn)行了篩選，篩選出多態(tài)性好且清晰度高的13條引物用于5個居群39個樣本的擴(kuò)增。結(jié)果共檢測到196個位點，其中190個為多態(tài)性位點，多態(tài)性位點百分率(PPB)為96．94％。根據(jù)不同個體的擴(kuò)增圖譜構(gòu)建了0、1矩陣輸入計算機(jī)。數(shù)據(jù)處理結(jié)果如下：POPGENE分析表明羊躑躅具有豐富的遺傳多
3、樣性(H-O．3342，I=O．5007)。Nei’s遺傳多樣性和AMOVA分析表明，居群間存在有一定的遺傳分化(6st分別為0．5084和0．5320)。由UPGMtA聚類分析可知金溪、廬山、井岡山和武寧四個居群聚為一一支，瑞昌居群單獨作為一支。由Mante]相關(guān)性檢測可知，居群的遺傳距離與地理距離有一定的相關(guān)性，但并不顯著。通過對羊躑躅遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)的研究，提出了保護(hù)羊躑躅遺傳多樣性的策略：1．實施就地保護(hù)和遷地保護(hù)策略；2．建議在居群間進(jìn)行植株和幼苗移栽，以提高居群間的基因交流，以最大限度保護(hù)羊躑躅自寸遺傳多樣性；3．保護(hù)和重建羊躑躅居群的適宜環(huán)境。關(guān)鍵詞：羊躑躅；ISSR分
4、子標(biāo)記；遺傳多樣性；遺傳結(jié)構(gòu)；保護(hù)策略AbstractTheimproved2xCTABmethodwasusedtoextractDNAfromRhododendronmolleG．Donplant-leaveswhichwel-egatheredfromJinxi、LushanMountain、JinggangshanMountain、WuningandRichang．TherecyclingparameterswereoptimizedandoptimalreactionsystemsuitableforISSR-PCRamplificationwasestablishedinth
5、epaper．Theprimersthatcarlproducepolymorphic，clearandbrJi曲tbandshavebeen∞lectedforISSRamplificationanalysisOil39samplesinRhododendronmolleG．Donspeciesfrom167randomprimers．Theresultsshowthatacetonecanimprovethepurityofoutput．TheoptirealreactionsystemofISSR-PCRforRhododendronmolleG．DonWaSdetermineda
6、sfollows：templateDNA30～45ng，Mg“2．0～2．5mmol／l，dNTPs0．I～O．15mmol／l，primer0．3～0．4pmoVl，TaqDNApolymeraseO．5～1．0U；10xPCRbuffer2．5ItlandddH20intotal251slreactionsystem，TheopticalamplificationprogramWasobtained：94℃5min，1cycle；94"Clmin，55℃30s，72℃2min,30cycle；72"CImin,Icycle；4*Cstop．13primersthatcallprodu
7、cepolymorpMc，clearandbrightbandshavebeenselectedforISSRamplificationanalysis011DNAsamplesin5RhododendromnolleG．Donpopulationsfrom167randomprimers．Using13primers，thetotal196lociwerefound，190ofwhichwerepolymorpb_icloci．T
