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1、第四節(jié)顯微鑒定顯微鑒定(microscopicalidenifi-ction)是利用顯微鏡來觀察生藥的組織構(gòu)造、細(xì)胞形狀以及內(nèi)含物,描述顯微特征,制定顯微鑒別依據(jù),用以鑒定生藥品種和質(zhì)量的重要手段之一。一、顯微鑒定的常用方法顯微鑒定組織鑒定:觀察藥材的切片或磨片,鑒別其組織特征,適合于完整的藥材或粉末特征相似的同屬藥材的鑒別;粉末鑒定:觀察藥材的粉末制片或解離片鑒別其細(xì)胞分子及內(nèi)含物的特征,適合于破碎、粉末狀藥材或中成藥的鑒別。切片類型橫切片或縱切片切片方法徒手切片:10~20μm,最為簡(jiǎn)便、快速,較為常用。石蠟切片:便于教學(xué)用?;咔衅河?/p>
2、專用機(jī)器切制。冰凍切片:宜于科研,不利于教學(xué),無法染色。解離組織片:可用氫氧化鉀法,使細(xì)胞間質(zhì)溶解,細(xì)胞分離后觀察目的物。表面片:葉、花、果實(shí)、種皮等多用,可觀察各部位的表皮特征。粉末片:水合氯醛透化片;水合氯醛不透化片;醋酸甘油片或稀甘油片或水裝片。磨片:觀察礦物藥,相當(dāng)于固定片。(十四)中成藥顯微鑒別要點(diǎn)中藥丸散錠丹等成方制劑,大多直接用各種粉末生藥及生藥浸膏配制而成。顯微鑒定是鑒定中成藥丸散錠丹和制定品質(zhì)標(biāo)志的科學(xué)方法之一,對(duì)保證中成藥的質(zhì)量,有一定的科學(xué)意義和應(yīng)用價(jià)值。生藥的粉末鑒定研究對(duì)于中成藥的科學(xué)鑒定有重要作用。1.了解組方生藥
3、、劑型和制法熟悉處方中組成藥物的顯微特征是中成藥鑒別的基礎(chǔ)。中成藥的顯微鑒別要比中藥材粉末鑒別復(fù)雜得多,制備方法及輔料等會(huì)產(chǎn)生一定的影響和干擾。2.根據(jù)處方明確專屬特征中成藥顯微鑒定,一般根據(jù)處方,對(duì)各組成生藥粉末特征作分析比較,選取各藥具專屬性的顯微特征,作為鑒別依據(jù)。六味地黃丸是由熟地黃、山茱萸、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉六味藥組成,每味藥都有數(shù)個(gè)顯微特征,大部分特征又有橫向類別的交叉。選取六味藥各具專屬性的顯微特征,這樣六味藥物均可鑒別。三、掃描電鏡等的應(yīng)用1.偏振光顯微鏡(偏光顯微鏡)在偏光顯微鏡下,生藥的鑒別要素在色彩上表現(xiàn)出一定的變
4、化,可作為大多數(shù)植物、動(dòng)物、礦物類生藥的顯微鑒別依據(jù)之一。偏振光顯微鏡例如:淀粉:在偏光顯微鏡下呈現(xiàn)黑十字現(xiàn)象,不同類型的淀粉其黑十字形象不同;草酸鈣結(jié)晶:類型多樣,在偏光顯微鏡下呈不同的多彩顏色;石細(xì)胞:在植物體內(nèi)廣泛分布,其細(xì)胞壁在偏光顯微鏡下呈亮黃色或亮橙黃色;纖維、導(dǎo)管、礦物類物質(zhì):在偏光顯微鏡下則呈強(qiáng)弱不同的色彩;動(dòng)物的骨碎片、肌纖維、結(jié)晶狀物、毛茸等也呈現(xiàn)出不同的偏光特性。麝香仁(顯微)麝香仁(偏光)2.掃描電子顯微鏡(掃描電鏡)掃描電鏡分辨率高,放大倍率5倍~10萬倍,能使物質(zhì)的圖像呈現(xiàn)顯著的表面立體結(jié)構(gòu)(三維空間)的特征,觀察
5、的樣品制備操作又較簡(jiǎn)易,所以在生藥鑒定,特別在同科屬種間的表面結(jié)構(gòu)的鑒別比較上,成為一種新的手段。掃描電鏡下的細(xì)菌第五節(jié)理化鑒定理化鑒定(physicalandchemicalidentification):利用某些物理的、化學(xué)的或儀器分析方法,對(duì)生藥及其制劑中所含有效成分或主要成分進(jìn)行定性和定量分析,以鑒定其真?zhèn)魏推焚|(zhì)優(yōu)劣程度的一種方法。理化鑒定中藥理化鑒定發(fā)展很快,新的分析手段和方法不斷出現(xiàn)??纱_定中藥的真?zhèn)蝺?yōu)劣;開發(fā)利用新資源;指導(dǎo)中藥材的栽培加工,擴(kuò)大藥用部分;制訂中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。常用的理化鑒定方法物理常數(shù)包括相對(duì)密度、旋光度、折光率、
6、硬度、黏稠度、沸點(diǎn)、熔點(diǎn)等。一般理化鑒別呈色反應(yīng):利用生藥的某些化學(xué)成分能與某些試劑產(chǎn)生特殊的顏色反應(yīng)來鑒別。多在試管中進(jìn)行,或在生藥切面或粉末上滴加各種試液,觀察呈現(xiàn)的顏色以了解某成分所存在的部位。沉淀反應(yīng):利用生藥某些化學(xué)成分能與某些試劑產(chǎn)生特殊的沉淀反應(yīng)來鑒別。泡沫反應(yīng)和溶血指數(shù)的測(cè)定微量升華利用中藥中所含的某些化學(xué)成分,在一定溫度下能升華的性質(zhì),獲得升華物,在顯微鏡下觀察其結(jié)晶形狀、顏色及化學(xué)反應(yīng)作為鑒別特征。顯微化學(xué)反應(yīng)(microchemicalreaction)將生藥的干粉、切片或浸出液少量,置于載玻片上,滴加某些化學(xué)試液,使產(chǎn)
7、生沉淀或結(jié)晶,在顯微鏡下觀察反應(yīng)結(jié)果;或觀察所產(chǎn)生的特殊顏色。熒光分析利用生藥中所含的某些化學(xué)成分,在紫外光或自然光下能產(chǎn)生一定顏色的熒光性質(zhì)進(jìn)行鑒別。例如黃連飲片顯黃色熒光;浙貝母粉末顯亮淡綠色熒光;大黃粉末顯深棕色熒光。色譜法常用以下三種色譜法:薄層色譜法(TLC)氣相色譜法(GC)高效液相色譜法(HPLC)分光光度法紫外分光光度法可見分光光度法紅外分光光譜法原子吸收分光光度法第六節(jié)DNA分子標(biāo)記鑒定DNA分子遺傳標(biāo)記技術(shù)直接分析生物的基因型,具有下列特點(diǎn):遺傳穩(wěn)定性遺傳多樣性化學(xué)穩(wěn)定性生藥鑒定常用的DNA分子標(biāo)記方法限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)(
8、restrictionfragmentlengthpolymorphism,簡(jiǎn)稱RFLP);隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)(randomamplifiedpoly