植物檢疫學植物檢疫性病毒病害課件

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1、第七章檢疫性植物病毒2006.10.2檢疫性植物病毒的檢驗方法番茄環(huán)斑病毒馬鈴薯帚頂病毒*其他檢疫性植物病毒南方菜豆花葉病毒、可可枝腫病毒、香石竹環(huán)斑病毒了解檢疫性植物病毒的種類、分布及重要性，掌握植物檢疫性病毒的檢驗方法，掌握番茄環(huán)斑病毒、馬鈴薯帚頂病毒引起病害的癥狀、病原特性、寄主范圍、病害的發(fā)生發(fā)展規(guī)律以及檢驗措施。檢疫性植物病毒的檢驗方法生物學檢測技術血清學檢測技術電子顯微鏡技術分子生物學檢測技術1.生物學檢測技術原理：植物病毒對鑒別寄主或指示植物的特異反應。鑒別寄主譜：對一種病毒有特殊反應的一組寄主，一般包括3～5種不同反應類型的寄主植物。

2、一般包括：系統(tǒng)侵染的寄主局部侵染的寄主不受侵染的寄主例1，TMV和CMV在田間煙草植株上都呈花葉癥，為了確定是否有TMV，或是將兩者區(qū)分開，便可通過下列三種植物的接種來確定。2.血清學檢測技術原理：抗原與抗體的特異結(jié)合方法：免疫電泳和免疫電鏡、瓊脂雙擴散、ELISA等。兩種抗原相同，都與已知的抗血清反應瓊脂雙擴散反應沉淀線判斷圖抗原1抗血清抗原2抗血清不專化含有兩種以上的抗體抗原2抗原1抗原2抗原1抗血清抗血清兩種抗原有一定的親緣關系但不完全相同3.電子顯微鏡技術原理：以電磁波為光源，利用短波電子流，分辨率達到0.99?，比光學鏡要高1000倍以上主要

3、方法：超薄切片、負染技術、免疫電鏡技術4.分子生物學檢測方法分子雜交檢測PCR技術檢測分子雜交在DNA和RNA之間進行，依據(jù)是RNA與互補的DNA之間存在著堿基的互補關系。在一定的條件下，RNA--DNA形成異質(zhì)雙鏈的過程稱為雜交。其中預先分離純化或合成的已知核酸序列片段叫做雜交探針(probe)，由于大多數(shù)植物病毒的核酸是RNA，其探針為互補cDNA也稱為cDNA探針。植物病毒分子探針具專一性強、靈敏度高、準確快速等優(yōu)點分子探針的長度一般在500～1500核苷酸堿基對（bp）常用廣譜分子探針，即包括多個不同?；曰虻暮塑账崞瑪唷CR技術檢測PCR

4、（Polymerasechainreaction）聚合酶聯(lián)反應：將極微量的靶DNA片斷，在4h左右特異性擴增上百萬倍。植物病毒主要是RNA病毒，進行PCR檢測時，需要將RNA逆轉(zhuǎn)錄成互補DNA（cDNA)，再進行PCR，即RT－PCR技術。檢疫性植物病毒的檢驗方法番茄環(huán)斑病毒馬鈴薯帚頂病毒*其他檢疫性植物病毒南方菜豆花葉病毒、可可枝腫病毒、香石竹環(huán)斑病毒了解檢疫性植物病毒病害的種類、分布及重要性，掌握植物檢疫性病原病毒的檢驗方法，掌握番茄環(huán)斑病、馬鈴薯帚頂病的癥狀、病原特性、寄主范圍、病害的發(fā)生發(fā)展規(guī)律以及這兩種病害的檢驗措施。番茄環(huán)斑病毒Tomato

5、ringspotvirus分布：1936年，美國東部新澤西發(fā)生ToRSV至今已有30多個國家和地區(qū)發(fā)現(xiàn)有該病毒，主要集中在北美溫帶地區(qū)，即美國和加拿大。寄主：ToRSV寄主范圍廣，包括雙子葉和單子葉植物的35個科，自然界，ToRSV主要侵染木本植物，草本及觀賞植物。危害情況：1975年，ToRSV侵染加拿大安大略的地區(qū)葡萄，產(chǎn)量損失76％～95％，甚至造成絕產(chǎn)。同年，ToRSV侵染后，紐約葡萄嚴重減產(chǎn)，奧爾良懸鉤子果實減產(chǎn)21％～50％。癥狀：番茄癥狀（番茄環(huán)斑?。┲l卷曲和壞死，嫩葉、葉柄生褐色壞死環(huán)和波紋，果實受侵染，外表產(chǎn)生環(huán)斑，灰色到褐色栓皮葡

6、萄上的癥狀（葡萄黃脈?。┤~黃脈、斑駁、環(huán)斑，節(jié)間縮短呈蓮蓙狀叢生，植株嚴重矮化，果實敗育變小，至絕產(chǎn)，幾年內(nèi)植株漸漸壞死。植株剝皮后，可見增厚的海綿狀韌皮組織及壞死凹陷蘋果上的癥狀（appleunionnecrosisanddecline）砧木和接穗接合部腫脹，裂開，剝開樹皮，樹皮內(nèi)側(cè)變厚，多孔，愈合斑連接處有不明顯的線，在這條線相對方向的形成層表面也有一類似的線，沿著這條線有一小的深溝或一條光滑的細縫，壞死的樹皮覆蓋在溝或縫上。葉變少，變小，黃化，嫩枝呈束狀叢生，果實較小，果皮顏色加深。樹皮顏色淡紅桃樹和李屬其它樹種上的癥狀（桃樹黃芽花葉）：沿中脈產(chǎn)

7、生扁橢圓形羽緣狀病斑，由灰綠色變?yōu)闇\綠色，芽發(fā)育成為小而變形的叢生葉，成淺黃色而死亡。（桃樹莖痘?。簶淦ぷ兒瘢l(fā)軟，海綿狀，剝開樹皮，樹干上出現(xiàn)凹陷的痘斑和溝槽。葉片褪綠，葉芽發(fā)育推遲，落葉提前，果實畸形，果味變異，提前成熟和脫落。復盆子上的癥狀：侵染當季不表現(xiàn)癥狀，第二年葉片表現(xiàn)黃色斑駁，條紋或脈褪綠，葉片生長推遲，病株表現(xiàn)不結(jié)果或形成易碎果懸鉤子上的癥狀：植株矮化，小果并減產(chǎn)，幼齡植株葉片出現(xiàn)褪綠環(huán)斑。第二年，葉片癥狀不明顯，但新葉出現(xiàn)偏上性，早落。第三年有10％～80％的果枝死亡。病原：番茄環(huán)斑病毒學名Tomatoringsoptvirus（T

8、oRSV）異名煙草環(huán)斑病毒2號TomatoringspotvirusNo.2煙病毒13號Nic