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1、酶聯(lián)捕獲法檢測(cè)抗TORCHIgM抗體的實(shí)驗(yàn)分析歐陽(yáng)輝（廣東省佛山順德婦幼保健院檢驗(yàn)科528300）【摘要】目的建立檢測(cè)TORCHIgM抗體的酶聯(lián)捕獲技術(shù)。方法應(yīng)用酶聯(lián)捕獲法檢測(cè)103例弓形蟲（TOX）、135例風(fēng)疹病毒（RV）、128例巨細(xì)胞病毒（CMV）、98例單純皰疹病毒（HSV）感染者血清中IgM抗體，并與常用的間接EUSA法進(jìn)行比較。結(jié)果酶聯(lián)捕獲法特異性及敏感性均高于間接EUSA法，且不受RF因子的影響。結(jié)論酶聯(lián)捕獲法敏感性高，特異性強(qiáng)、簡(jiǎn)便、快速，重復(fù)性好，只有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值?！娟P(guān)鍵詞】TORCH免疫球蛋白M酶聯(lián)免疫技術(shù)捕獲法【中圖分類號(hào)】R446
2、【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】2095-1752（2013）13-0154-02TORCH是指一組病原體：T即剛地弓形蟲，0即others,比如乙型肝炎病毒、HIV病毒、梅毒螺旋體等，R即風(fēng)疹病毒，C即巨細(xì)胞病毒，H即單純皰疹病毒［1】。弓形蟲感染是一種人和動(dòng)物共同可以發(fā)病的疾病，貓與其他動(dòng)物是主要傳染源。后天輕型感染者多無(wú)明顯的癥狀，但患者血清中可以檢測(cè)到抗體；重型感染者者即可引起各種各樣的臨床癥狀，如高熱、肌肉或關(guān)節(jié)疼痛、淋巴結(jié)腫大等；通過(guò)胎盤宮內(nèi)感染者可引起死胎、早產(chǎn)，出生后可表現(xiàn)一系列中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀以及眼、內(nèi)臟的先天損害［2］。風(fēng)疹病毒是一類RNA
3、病毒，人是其唯一自然宿主。RV通過(guò)呼吸道傳播，人類對(duì)RV普遍易感，一般癥狀較輕，預(yù)后佳，可通過(guò)注射RV疫苗進(jìn)行主動(dòng)防御［3］。妊娠早期（4個(gè)月內(nèi)的）孕婦感染RV后，病毒可通過(guò)胎盤傳染給胎兒，引起胎兒先天性風(fēng)疹綜合癥（CRS）。巨細(xì)胞病毒為雙鏈DNA病毒，主要通過(guò)血液、性、垂直傳播［3-4］o新生兒表現(xiàn)生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、肝脾腫大、黃疸、血小板減少性紫癜、溶血性貧血、呼吸窘迫、昏睡、抽搐等，多數(shù)患兒出生后數(shù)小時(shí)或數(shù)周內(nèi)死亡；存活者的后遺癥包括神經(jīng)性耳聾，永久性智力遲鈍、脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎、視力喪失、癲癇以及心臟畸形等。單純皰疹病毒感染，主要可以引起人類的皰疹性U腔炎、
4、濕疹性皰疹、皰疹性角膜結(jié)膜炎、新生兒皰疹、皰疹性外陰陰道炎等［5］。本試驗(yàn)不區(qū)分單純皰疹病毒-I型或單純皰疹病毒-II型。因此，TORCH感染的檢測(cè)在臨床上具奮重要意義。在病原體急性感染的診斷中，通常需檢測(cè)TORCH項(xiàng)B的系列IgM抗體［3］。0前在市場(chǎng)上可見到的IgM抗體檢測(cè)試劑盒又可分為標(biāo)記抗原的捕獲法和標(biāo)記抗體的間接法2種。本研宄采用標(biāo)記抗原的方法，建立捕獲ELISA技術(shù)對(duì)經(jīng)PCR確診的103例TOX、135例RV、128例CMV、98例HSV陽(yáng)性血清進(jìn)行檢測(cè)，并與間接EUSA法作比較，現(xiàn)報(bào)道如下。1.材料和方法1.1血清來(lái)源103例TOX、135例
5、RV、128例CMV、98例HSV陽(yáng)性血清（經(jīng)PCR從TORCH感染者血清中篩選），79份類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者血清及197例正常人血清均來(lái)自廣東省佛山順德婦幼保健院。以上患者及正常人經(jīng)肘靜脈采血，分離血清后置于-20'C冰箱保存。1.2主要試劑TORCH捕獲ELISA法試劑盒購(gòu)自意大利DIESSEDiagnosticaSeneseS.P.A.公司，TORCH間接EUSA法試劑盒購(gòu)自德國(guó)歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷冇限公司。1.3方法參照各廠家試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行試驗(yàn)操作。證實(shí)兩種方法在檢驗(yàn)TORCH患者血清特異性IgM吋的靈敏度和特異性，并且分析是否存在差異［6］。分別用以
6、上兩種方法檢測(cè)30份類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者血清，比較RF因子對(duì)以上兩種試劑的干擾性，并分析是否存在差異。1.4數(shù)據(jù)處理采用EXCEL、SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，使用t檢驗(yàn)比較結(jié)果差異，P〉0.05吋差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。1.結(jié)果2.1兩種ELISA方法檢測(cè)IgM的靈敏度和特異性比較PCR試劑及2種試劑盒共檢測(cè)661份臨床血清樣本。捕獲ELISA法試劑盒的檢測(cè)結(jié)果見表1，間接ELISA法試劑盒的檢測(cè)結(jié)果見表2。表1PCR試驗(yàn)及捕獲ELISA法試劑盒的檢測(cè)結(jié)果捕獲法試劑盒PCR試劑合計(jì)陽(yáng)性陰性陽(yáng)性4630463陰性1197198合計(jì)464197661表2PCR試
7、驗(yàn)及捕獲EUSA法試劑盒的檢測(cè)結(jié)果間接法試劑盒PCR試劑合計(jì)陽(yáng)性陰性陽(yáng)性4637470陰性1190191合計(jì)464197661捕獲ELISA法試劑盒和間接ELISA法試劑盒的檢測(cè)靈敏度均為99.8%[463/464],特異性分別為100°/。[197/197]，96.4%[190/197],結(jié)果符合率分別為99.8%[(463+197)/661],98.8%[(463+190}/661]。兩種試劑盒的檢測(cè)靈敏度、特異性、結(jié)果符合率均達(dá)到試劑盒要求(95%)，但捕獲EUSA特異性明顯高于間接ELISA(P>0.05)o2.2RF因子影響試驗(yàn)79份類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)
8、炎患者血清，用捕獲ELISA法檢測(cè)IgM抗體，其結(jié)果均為陰性，而用
