abcc10在浸潤性乳腺癌中的表達及耐藥研究

《abcc10在浸潤性乳腺癌中的表達及耐藥研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。

1、ABCC10在浸潤性乳腺癌中的表達及耐藥研究揚州市第一人民醫(yī)院江蘇揚州225001摘要：目的：檢測ABCC10在浸潤性乳腺癌組織中的表達，探討其與組織學(xué)類型、分級和TNM分期的關(guān)系，檢測ABCC10陽性與陰性癌組織對化療藥物的敏感性。方法：采用免疫組化EnVinsion法檢測ABCC10在55例浸潤性乳腺癌組織中的表達，進行統(tǒng)計學(xué)分析。采用MTT法檢測相應(yīng)癌組織對化療藥物的敏感性，分析其與ABCC10表達的相關(guān)性。結(jié)果:ABCC10主要定位于胞膜上和胞質(zhì)中。陽性率為67.3%,不同病理分級、TNM分期間ABCC10表

2、達差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002、0.001)。乳腺癌組織的耐藥性試驗結(jié)果與其相應(yīng)組織中ABCC10的表達做相關(guān)性檢驗，紫衫醇、多丙他賽、表阿霉素(P=0.000),相關(guān)系數(shù)分別為分別為0.561、0.614、0.512。結(jié)論:ABCC10在乳腺癌組織中高表達，表達的高低與組織學(xué)分級,TNM分期成正相關(guān)，顯著影響紫杉醇等化療藥物的耐藥產(chǎn)生。關(guān)鍵詞：乳腺癌，化療，耐藥【中圖分類號】R712.5【文獻標(biāo)識碼】A【文章編號】1001-5213(2016)08-0135-02化療是乳腺癌綜合治療的重要組成部分，但化療的療

3、效與腫瘤細胞是否耐藥有密切的關(guān)系，一旦出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，包括原發(fā)性和繼發(fā)性耐藥，則會導(dǎo)致化療療效差，對于乳腺癌化療耐藥的研究，目前熱點在于腫瘤耐藥基因及其相關(guān)蛋白的研究［1］。研究表明ABC家族膜轉(zhuǎn)運體在耐藥中起主要作用［2］,ABC膜轉(zhuǎn)運蛋白家族即ATP結(jié)合盤(ATPbindingcassette,ABC)膜轉(zhuǎn)運蛋白家族，其耐藥作用是通過膜轉(zhuǎn)運蛋白把細胞癌細胞內(nèi)的化療藥物泵出細胞外來實現(xiàn)，ABC家族的一個亞家族(C族)也稱為MRP(multidrugresistanceprotein,多藥耐藥相關(guān)蛋白)家族，人類ABC

4、C10(MRP7)是MRP家族最新發(fā)現(xiàn)的成員［3］。但ABCC10與乳腺癌的關(guān)系研究甚少，木文就乳腺癌中ABCC10的表達以及對常見乳癌化療藥物的耐藥實驗，來對乳腺癌耐藥的機制做一個探討。1材料與方法1.1標(biāo)本來源收集2014年11月-2015年11月我院乳腺外科浸潤性乳腺癌組織手術(shù)切除標(biāo)本及相應(yīng)正常組織55例?；颊咂骄挲g(56.13&plUsmn;8.70)歲，中位年齡61歲。其中髓樣癌3例，粘液癌1例，浸潤性導(dǎo)管癌51例,手術(shù)前患者均未行化療或放療。術(shù)后即刻將標(biāo)本置于預(yù)先盛有無菌RPMI1640培養(yǎng)液的無菌管中

5、，部分新鮮癌組織用于化療藥物藥敏試驗，將相應(yīng)標(biāo)本用10%甲醛固定，經(jīng)脫水、透明，常規(guī)石蠟包埋。由病理科經(jīng)驗豐富醫(yī)師進行癌組織病理分類、分級診斷，術(shù)后進行TNM分期。1.2主要試劑ABCC10兔抗人多克隆抗體購自美國SantaCruzTechnology公司，二抗購自美國SantaCruzTechnology公司，免疫組化試劑盒購自大連寶生物工程有限公司。紫杉醇、多西他賽購自揚子江藥業(yè)、表阿霉素、環(huán)磷酰胺、吉西他濱、長春瑞濱分別購自輝瑞制藥有限公司、德國BAXTERONCOLO公司、江蘇豪森藥業(yè)、吉林一心藥業(yè)公司。RP

6、MI1640、胎牛血清購自美國Gibco公司，胰蛋白酶和購自Amroso公司，MTT和DMSO為Sigma公司產(chǎn)品。1.3方法1.3.1癌組織藥物敏感實驗將新鮮癌組織用含青鏈霉素的生理鹽水反復(fù)沖洗，勻漿破碎癌組織，用尼龍膜過濾后，用RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細胞濃度到105mL-1,臺盼藍染色計數(shù)；將細胞懸液接種于96孔培養(yǎng)板,190μL/孔，設(shè)空白組、對照組和實驗組(實驗組分為高濃度和低濃度組)，每組設(shè)4個復(fù)孔；在37°C、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h,加入上述化療藥10μL,使高濃度組的終濃度為人體

7、血漿濃度。陰性對照孔和空白孔加10μLRPMI1640,培養(yǎng)48h后每孔加入5mg/mL的MTT20μL,繼續(xù)培養(yǎng)4h。吸去上清后,每孔加入二甲基亞砜150μL,混勻，振蕩培養(yǎng)板lOmin,使孔中沉淀完全溶解。酶標(biāo)儀讀取波長570nm處各孔吸光度值。1.3.2ABCC10蛋白檢測標(biāo)本經(jīng)5Lm連續(xù)切片,分別做HE和免疫組化染色。免疫組化染色采用兩步法(EnVisionTM),步驟如下：切片脫蠟至水，尿素消化,3%過氧化氫封閉，用檸檬酸緩沖液進行微波修復(fù),冷卻，兔血清封閉，加一抗(lB200)4e過夜。

8、從冰箱取出37e復(fù)溫，用自來水沖洗抗體，加入山羊二抗(EnVision),37e恒溫反應(yīng)(中間各步用PBS洗)，加DAB顯色，顯微鏡觀察終止顯色。用蘇木精輕微復(fù)染，脫水透明封片，在光鏡下觀察。對照組設(shè)正常組織和空白(以PBS代替一抗)對照。1.4判定標(biāo)準(zhǔn)1.4.1藥物敏感性判定IR<30%為耐藥,31%?50%低度敏感,51%~70%為中