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《生物技術(shù)制藥概論》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、1、基因工程制藥的主要步驟(1)從供體細胞中分離出基因DNA,用限制性核酸內(nèi)切酶分別將外源DNA和載體分子切開(2)用DNA連接酶將含有目的基因的DNA片段接到載體分子上，形成重組的DNA分子(3)將人工重組的DNA分子導(dǎo)入它們能夠正常復(fù)制的受體細胞中(4)短時間培養(yǎng)轉(zhuǎn)化細胞，以擴增DNA重組分子或使其整合到宿主細胞的基因組屮(5)篩選和鑒定轉(zhuǎn)化細胞，獲得使外源基因高效穩(wěn)定表達的基因工程菌或細胞(6)將基因工程菌發(fā)酵，收獲有0的蛋白的發(fā)酵液，采用一系列分離純化手段從發(fā)酵液中獲得高純度的目的產(chǎn)物(7)對目的蛋白進行過濾除菌，對某些要求更為嚴格的產(chǎn)物還需
2、除熱源等處理(8)對目的蛋白進行制劑研究，并進行半成品或成品檢測，檢測合格后進行包裝2、目的基因的制備(1)從基因組中直接分離a密度梯度離心法b單鏈酶法c分子雜交法d限制性內(nèi)切酶降解法(2)通過RNA合成DNA(3)基因的化學(xué)合成(4)聚合酶鏈反應(yīng)法3、載體的定義及條件定義：能將外源目的DNA導(dǎo)入受體細胞，并能自我復(fù)制和增殖的工具稱為載體條件：1能自我制2具有多個限制酶的識別位點3具有遺傳表型或篩選標記4有足夠的容量以容納外源DNA片段5可導(dǎo)入受體細胞4、什么是限制性內(nèi)切核酸酶能識別DNA鏈特定核冇酸序列，并能切割的酶II型限制酶的特點a、識別序列平
3、齊末端4-7個核苷酸同一位點斷裂回續(xù)序列：正續(xù)反續(xù)一樣b、酶切方式粘性末端：斷裂位置交錯5、目的基與載體DNA的連接方式1同種限制性內(nèi)切酶產(chǎn)物之間的連接2同尾酶產(chǎn)生的粘性末端連接3不同末端結(jié)構(gòu)的連接4平末端的DNA連接6、重組基導(dǎo)入受體cell的方式1轉(zhuǎn)化(受體cell處于感受器)2轉(zhuǎn)導(dǎo)(供體cell—受體cellor目的基因一受體cell)3轉(zhuǎn)染目的gene-*真核genea、Ca3(PO4)2-DNA轉(zhuǎn)染法b、原生質(zhì)體融合c、脂質(zhì)體融合d、電穿孔法e、顯微注射f、基因槍法g、病毒感染法7、重組子的篩選(1)凝膠電泳法目的基因+載體一重組子檢測方法
4、：裂解宿主cell重組子與空載體電泳比較對象：較大的目的蛋白(2)限制性內(nèi)切酶分析法(3)印跡雜交法探針：與DNA/RNA雜交的核苷酸序列用放射性同位素/生物素標記(4)PCR法(5)DNA序列分析法鑒定方法檢測對象探針原位雜交DNADNA點雜交DNADNASouthern雜交DNADNANorthern雜交RNADNAWestern雜交蛋白質(zhì)(抗原)抗體8、基因工程菌在傳代過程中質(zhì)粒不穩(wěn)定的原(1)分裂不穩(wěn)定：分裂時子代不含質(zhì)粒(2)結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定：發(fā)生缺失、重排、修飾等提高質(zhì)粒穩(wěn)定性的方法(1)選擇合適的宿主細胞(2)選擇合適的載體(質(zhì)粒)(3)加入
5、選擇性壓力(抑制/排除質(zhì)粒丟失菌的生長)(4)分階段培養(yǎng).?a、生長階段：阻遏外源gene表達b、表達階段：去阻遏(5)控制培養(yǎng)條件9、動物細胞培養(yǎng)的營養(yǎng)條件(1)足夠的營養(yǎng)(包括糖、氨基酸、維生素、無機鹽等)(2)—定的生長環(huán)境(合適的溫度、PH及無菌條件〉10、培養(yǎng)的分類及特點天然培養(yǎng)基(動物體液或組織提取物)合成培養(yǎng)基(人工模擬天然培養(yǎng)基的主要成分)無血清培養(yǎng)基(合成培養(yǎng)基+添加劑)11、動物細胞融合技術(shù)的基本過程(1)細胞的準備(2)誘導(dǎo)融合(3)雜交細胞的篩選(4)雜交細胞克隆12、微載體培養(yǎng)的特點(1)細胞附著表面積增大(2)細胞生忪環(huán)境
6、均一，條件容易控制(1)取樣及細胞計數(shù)簡單(4)細胞與培養(yǎng)液易于分離(1)大規(guī)模培養(yǎng)只耑對微生物發(fā)酵罐或氣升式層培養(yǎng)系統(tǒng)稍加改進(2)適合于培養(yǎng)原代細胞、二倍體細胞株以及基因重組細胞13、影響原生質(zhì)體融合的因素幽齡、培養(yǎng)及成分、PEG、外界因素14、發(fā)酵方式的分類(1)固體發(fā)酵(曲法發(fā)酵)(2)液體發(fā)酵：a分批發(fā)酵b補料分批發(fā)酵c連續(xù)發(fā)酵15、溶氧異常下降的原因：(1)設(shè)備或工藝故障或變化(2)污染好養(yǎng)雜菌(3)菌體代謝異常引起溶氧異常上升的因素(1)設(shè)備故障(2)感染烈性噬菌體(生產(chǎn)菌株死亡)(3)菌體代謝受到抑制溶氧的控制(1)調(diào)節(jié)通氣速率和攪拌
7、功率攪拌在提高Do中的作用A、空氣打散成小氣泡，氣體接觸面小B、液體徑向運動，延長氣泡在液體中的停留時間C、減少氣泡周圍液膜厚度，減少傳質(zhì)阻力(2)控制菌體濃度控制培養(yǎng)基濃度(3)其他方法(降溫、補水、加表面活性劑)16、(1)什么是定化酶?指通過一定的技術(shù)，將提純化的酶制劑固定或限制在一定的相對密閉空間里，使之不但能夠連續(xù)地進行反應(yīng)，而且反應(yīng)后的酶又可以反復(fù)使用(2)制定固定化酶的方法A、載體結(jié)合法物理吸附法(利用載體A外表面性質(zhì)，將酶吸附)離子結(jié)合法(通過離子鍵結(jié)合酶與載體交聯(lián)的固定法)共價結(jié)合法(通過共價鍵結(jié)合酶與載體固定方法)B、交聯(lián)法利用雙
8、功能或多功能試劑，直接與細胞表而的各種反應(yīng)基團反應(yīng)，使其彼此共價交聯(lián)形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，從而同定細胞C、包埋法將微
