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1、丙戊酸鈉聯(lián)合三氧化二砷對(duì)HL【摘要】目的：探討丙戊酸鈉（sodiumvalproate，SV）聯(lián)合三氧化二砷(arsenoustrioxide，As2O3)誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡與bcl-2﹑baxmRNA之間可能的關(guān)系。方法：在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HL-60細(xì)胞中分別加入不同濃度的SV和1.0μmol/LAs2O3，采用MTT比色法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率，用AnnexinV-FITC/PI雙重標(biāo)記經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡率，RT-PCR檢測(cè)bcl-2，baxmRNA在細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果：SV抑制HL-
2、60細(xì)胞生長(zhǎng)并促進(jìn)其凋亡，SV聯(lián)合1.0μmol/LAs2O3對(duì)HL-60細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制及促凋亡作用更明顯。SV單獨(dú)或聯(lián)合1.0μmol/LAs2O3作用于HL-60細(xì)胞，bcl-2mRNA表達(dá)下降，baxmRNA表達(dá)增高。結(jié)論：SV與As2O3有協(xié)同作用，抑制HL-60細(xì)胞生長(zhǎng)并誘導(dǎo)其凋亡，bcl-2﹑baxmRNA的表達(dá)變化可能參與了SV對(duì)HL-60細(xì)胞的促凋亡作用。【關(guān)鍵詞】丙戊酸鈉；三氧化二砷；HL-60細(xì)胞；凋亡；Bcl-2；Bax[Abstract]Objective:Tostudy
3、thegrovalproate(SV)andarsenoustrioxide(As2O3),andtoexploretherelationshipbetRNA.Methods:VariousconcentrationsofSVand1.0μmol/LAs2O3easurethegroetryeasuretheexpressionofbcl-2andbaxmRNA.Results:SVol/LAs2O3alone.Theexpressionofbcl-2mRNAinHL-60cellscultur
4、edRNAincreased.Conclusion:binationofSVandAs2O3cansynergisticallyinactivateHL-60cells,inhibitthecellproliferationandinduceapoptosis.TheinductionofapoptosisinducedbySVorthebinationofSVandAs2O3maybemediatedbydoRNAandbyup-expressbaxmRNA.[Keyvalproate；Ars
5、enoustrioxide;HL-60cells；Apoptosis；Bcl-2;Bax白血病是由于造血系統(tǒng)中某一系列細(xì)胞的異常增生，并在骨髓、肝、脾、淋巴結(jié)等各臟器廣泛浸潤(rùn)的造血系統(tǒng)惡性腫瘤。傳統(tǒng)的化療藥物在殺傷白血病細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)正常骨髓細(xì)胞也產(chǎn)生不同程度的破壞。新型的化療藥物組蛋白脫乙?；?histonedeace-tylase，HDAC)抑制劑在體外對(duì)多種腫瘤細(xì)胞系有抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡及分化的作用，而對(duì)正常造血細(xì)胞無(wú)嚴(yán)重毒性，且與多種現(xiàn)有化療藥物有協(xié)同作用[1]。丙戊酸鈉這種長(zhǎng)期在臨床上
6、被當(dāng)作抗癲癇藥使用的支鏈羧酸制劑，近來(lái)被發(fā)現(xiàn)可以抑制HDAC，特別是Ⅰ型HDAC[2]。本次研究旨在以急性髓系白血病細(xì)胞株HL-60為靶細(xì)胞，通過(guò)聯(lián)合使用丙戊酸鈉、三氧化二砷(As2O3)，觀察丙戊酸鈉對(duì)白血病細(xì)胞增殖、凋亡的影響，并初步探討其作用的可能機(jī)制。1材料與方法1.1材料1.1.1細(xì)胞株急性髓系白血病細(xì)胞株HL-60（中科院上海細(xì)胞生物所）。1.1.2藥品與主要試劑RPMI-1640培養(yǎng)液、胎牛血清（美國(guó)Gibco公司）；丙戊酸鈉(SV)注射液（杭州賽諾菲圣德拉堡民生制藥有限公司）；A
7、s2O3注射液（哈爾濱伊達(dá)藥業(yè)有限公司）；DMSO、MTT（美國(guó)Sigma公司）；Annexin-V/PI細(xì)胞凋亡測(cè)定試劑盒、RT-PCR兩步法試劑盒（上海晶美生物工程有限公司）。1.2方法1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)將HL-60細(xì)胞置于含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)體系中，在37℃、5%體積分?jǐn)?shù)的CO2、飽和濕度下培養(yǎng)，48~72h傳代1次。1.2.2MTT法取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HL-60細(xì)胞接種于96孔板，每孔接種約1.5×103個(gè)細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分4組：對(duì)照組（只加培養(yǎng)液）、SV組（SV的終濃度分別為0
8、.5、1.0、2.0和4.0mmol/L）、As2O3組（1.0μmol/L）、SV+As2O3組（SV的終濃度分別為0.5、1.0、2.0和4.0mmol/L，As2O3均為1.0μmol/L）。每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，24、48、72h后檢測(cè)。檢測(cè)前4h加入5mg/mlMTT20μl，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，水平離心，吸干上清，加入DMSO150μl震蕩5min，490nm測(cè)定吸光度（OD值）。重復(fù)3次。細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率=（1－實(shí)驗(yàn)組OD值/對(duì)照組OD值）×100%1.2.3AnnexinV-FITC/PI雙
