凝聚胺法交叉配血試驗(yàn)

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1、凝聚胺法交叉配血試驗(yàn)操作規(guī)程[目的]保證交叉配血試驗(yàn)準(zhǔn)確，確保臨床輸血安全。[適用范圍]XXX醫(yī)院輸血科[職責(zé)]具有專業(yè)技術(shù)的工作人員主要負(fù)責(zé)XXX醫(yī)院輸血標(biāo)本的交叉配血試驗(yàn)，但只對該單份標(biāo)本負(fù)責(zé)。[相關(guān)文件]試劑采購、保存和使用管理程序設(shè)備采購、使用管理程序消毒與清潔管理程序標(biāo)本采集、運(yùn)輸、保存和報廢管理程序緊急用血管理程序[相關(guān)記錄]儀器設(shè)備的采購、使用和維護(hù)記錄儀器的溫度記錄恒溫水溫箱的換水和消毒記錄消毒液的配置記錄清潔消毒記錄試劑采購、使用記錄標(biāo)本交接和報廢記錄交叉配血記錄緊急用血記錄[實(shí)驗(yàn)原理]　　紅細(xì)胞表面帶有大量的負(fù)

2、電荷，以避免產(chǎn)生自發(fā)性聚集，當(dāng)紅細(xì)胞懸浮在電解質(zhì)中時，陽離子會被紅細(xì)胞的負(fù)電荷所吸引，此時紅細(xì)胞則被擴(kuò)散的雙層離子云所圍繞而形成Zeta電位，Zeta電位決定紅細(xì)胞之間的排斥作用。凝聚胺技術(shù)首先利用低離子溶液（LIM）降低介質(zhì)的離子強(qiáng)度，減少紅細(xì)胞周圍的陽離子云，以促進(jìn)紅細(xì)胞與血清（血漿）中的抗體結(jié)合。其次加入的凝聚胺（Polybrene）溶液是一種高價陽離子多聚物、肝素中和劑，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可以中和紅細(xì)胞表面帶有的負(fù)電荷，使紅細(xì)胞的Zeta電位降低，縮短紅細(xì)胞之間的距離，使紅細(xì)胞產(chǎn)生非特異性的凝集。最后加入的懸浮液（R

3、esuspending）具有中和凝聚胺（Polybrene）陽離子的作用，使正常的紅細(xì)胞非特異性凝集散開，試驗(yàn)結(jié)果為陰性；但如果紅細(xì)胞被相應(yīng)的抗體致敏，則會被凝聚胺凝集而不會散開，試驗(yàn)結(jié)果為陽性。[儀器器械]　　玻璃試管、玻片、記號筆、一次性塑料滴管、顯微鏡、交叉配血專用離心機(jī)、試管架、恒溫水溫箱、試劑保存冰箱、標(biāo)本保存冰箱。[試劑]生理鹽水、凝聚胺試劑、Anti-humanIgG血清，均為有合格證件的正品。[試劑保存和穩(wěn)定性]1．凝聚胺試劑須保存在2-25℃（其中陰、陽對照血清應(yīng)儲存在2~8℃）。在適當(dāng)儲存條件下有效期24個月。

4、2．抗人IgG血清低溫冰箱保存。復(fù)溶后放2—4℃冰箱保存。3．凝聚胺試劑①低離子介質(zhì)溶液（LIM）：含葡萄糖，乙二胺四醋酸-2鈉及穩(wěn)定劑。②凝聚胺溶液（Polybrene）：含凝聚胺，氯化鈉及穩(wěn)定劑。③復(fù)懸液（Resuspending）：含檸檬酸鈉，葡萄糖及穩(wěn)定劑。④陽性對照血清：含抗D血清、氯化鈉及穩(wěn)定劑。⑤陰性對照血清：含AB血漿、氯化鈉及穩(wěn)定劑，不含紅細(xì)胞血型抗體。[標(biāo)本收集與處理]1、受檢者血清：采集受檢者靜脈血2~3ml，經(jīng)1000r/min離心1分鐘或室溫靜置1小時后取上清。2、2~5%的受檢者紅細(xì)胞：采集受檢者靜脈血

5、或末梢血，先用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3次，再根據(jù)下表進(jìn)行紅細(xì)胞懸液的配制。懸液濃度（%）壓積紅細(xì)胞（滴）鹽水（滴）2140(2ml)5116(0.8ml)3、以上標(biāo)本有效期為三天；若受血者抽取標(biāo)本后，輸用過血液或血液制品，且輸用時間超過12小時的，必須重新采集標(biāo)本。4、標(biāo)本出現(xiàn)中度以上溶血者，為不合格標(biāo)本，不能用于檢測。[實(shí)驗(yàn)方法與步驟]1、分別制備受血者和獻(xiàn)血者3~5%的紅細(xì)胞懸液（取2支使管分別標(biāo)注為受血者管和獻(xiàn)血者管，再分別加入2ml生理鹽水，在受血者管加入1滴受血者紅細(xì)胞，在獻(xiàn)血者管加入1滴獻(xiàn)血者紅細(xì)胞，混勻后備用）。2、取4

6、支使管，分別標(biāo)注主側(cè)、次側(cè)、陰性對照和陽性對照：主側(cè)管：先加入2滴受血者血清（血漿），再加入1滴獻(xiàn)血者2~5%紅細(xì)胞懸液；次側(cè)管：先加入2滴獻(xiàn)血者血清（血漿），再加入1滴受血者2~5%紅細(xì)胞懸液；陰性對照管：先加入2滴陰性對照血清，再加入1滴獻(xiàn)血者2~5%紅細(xì)胞懸液；陽性對照管：先加入2滴陽性對照血清，再加入1滴獻(xiàn)血者2~5%紅細(xì)胞懸液。3、混勻后各加入LIM溶液0.65ml，輕輕混勻，于室溫下靜置1分鐘。4、再各加入2滴Polybrene溶液，輕輕混勻，于室溫下靜置15秒。5、用交叉配血專用離心機(jī)3400r/min（相當(dāng)于100

7、0g離心力）離心10秒，然后倒掉上清液（不要瀝干），讓管底殘留約0.1ml液體。6、輕輕搖動試管，目測紅細(xì)胞有無凝集，如無凝集，則必須重做。重做后仍然沒有凝集現(xiàn)象出現(xiàn)，可能試劑失效。7、最后各加入2滴Resuspending溶液，輕輕搖動試管并同時目測凝集是否散開，再進(jìn)一步倒在玻片上用顯微鏡觀察凝集是否散開。如果在60秒內(nèi)凝集散開，表明是由Polybrene引起的非特異性凝集，配血結(jié)果相合；如果凝集不散開，則為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，配血結(jié)果不相合。如果想進(jìn)一步檢測Anti-K抗體，則必須繼續(xù)做輔助性的抗球蛋白試驗(yàn)，步驟如

8、下：8、再滴入1滴Resuspending溶液。9、用生理鹽水洗紅細(xì)胞3—5次，并把最后一次上清液完全倒干。10、滴入2滴Anti-humanIgG血清，并混勻。11、用交叉配血專用離心機(jī)3400rpm離心15s.12、觀察有無凝集反應(yīng)，如果有凝集