李鳳輝論文第六次修改(定稿)

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1、本科畢業(yè)論文題目三種混養(yǎng)模式下魚類腸道菌群的PCR-DGGE的比較研究姓名李鳳輝學(xué)號2007308202544專業(yè)水族科學(xué)與技術(shù)指導(dǎo)教師熊邦喜職稱教授中國·武漢二○一一年六月分類號密級華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文三種混養(yǎng)模式下魚類腸道菌群PCR-DGGE的比較研究TheComparativeStudyonFishIntestinalMicrobiotafromThreePolyculturePatternsbyPCR-DGGE學(xué)生姓名:李鳳輝學(xué)生學(xué)號:2007308202544學(xué)生專業(yè):水族科學(xué)與技術(shù)指導(dǎo)教師:熊邦喜華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院二○一一年六月目

2、錄摘要II關(guān)鍵詞IIAbstractIIIKeyWordsIV前言11材料與方法41.1實驗材料41.1.1養(yǎng)殖模式與樣品采集31.1.2實驗主要儀器及試劑41.2試驗方法51.2.1魚類腸道樣品與水樣的制備51.2.2腸道及水樣微生物的提取61.2.3PCR-DGGE分析51.2.4DGGE圖譜中部分優(yōu)勢條帶的序列分析和系統(tǒng)發(fā)育分析71.2.5數(shù)據(jù)分析62結(jié)果與分析62.1DGGE指紋圖譜與腸道菌群群落差異82.2序列和系統(tǒng)發(fā)生分析123討論123.1魚類腸道菌群的作用123.2養(yǎng)殖模式與食性對魚類腸道菌群差異性分析133.3魚類腸道菌群結(jié)構(gòu)分析

3、13參考文獻(xiàn)14致謝16三種混養(yǎng)模式下魚類腸道菌群PCR-DGGE的比較研究摘要本文對三種混養(yǎng)模式下不同魚類的腸道菌群的差異進(jìn)行了比較研究。實驗采用PCR擴(kuò)增的變性梯度凝膠電泳(PCR-DGGE)技術(shù)。通過實驗,建立了三種養(yǎng)殖模式下魚類腸道細(xì)菌的DGGE圖譜,觀察各種魚類在不同的養(yǎng)殖模式下腸道細(xì)菌的多樣性差異。通過四個月的養(yǎng)殖和數(shù)據(jù)分析,PCR-DGGE指紋結(jié)構(gòu)及針對部分特定的PCR-DGGE譜帶序列分析顯示,不同模式下草魚的腸道菌群相似性較高(>42.2%),投喂配合飼料的草魚與攝食浮游生物的鰱、鳙、匙吻鱘腸道菌群結(jié)構(gòu)相差最大(<19%),鰱鳙腸

4、道菌群相似性較高(>41.6%),說明食性對魚類腸道菌群的影響超過了養(yǎng)殖模式對魚類腸道菌群的影響。同為濾食性魚類,除二號養(yǎng)殖模式下的鳙的腸道和匙吻鱘的消化道菌群具有較高的相似性(>50.3%)外,匙吻鱘的消化道菌群和鰱鳙的相似性低,說明魚的消化道結(jié)構(gòu)可能對腸道菌群也起一定的影響作用。細(xì)菌16SrDNAV3區(qū)特征片段經(jīng)DGGE分離條帶切割,共得到15條條帶,克隆測序后進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析,結(jié)果顯示這15條條帶分別歸屬于4個細(xì)菌類群:變形細(xì)菌門(Proteobacteria),擬桿菌門(bacteroidetes),厚壁菌門(Firmicutes)和梭桿菌

5、門(Fusobacteria),與以往報道的腸道菌群結(jié)構(gòu)相一致。不同的養(yǎng)殖模式會使魚類腸道微生物多樣性產(chǎn)生差異。相同養(yǎng)殖模式下,食性對腸道微生物的影響較大,說明魚類腸道菌群對食性具有高度的依賴性,食性的改變可能造成魚類腸道菌群的紊亂甚至?xí)?dǎo)致魚類對疾病的抵抗能力下降。這為魚類的飼料研發(fā)和魚病防治提供了基礎(chǔ)參考資料。關(guān)鍵詞混養(yǎng)模式;魚類;腸道菌群;PCR-DGGE;16SrDNATheComparativeStudyonFishIntestinalMicrobiotafromThreePolyculturePatternsbyPCR-DGGEAbst

6、ractThisarticlemadeacomparativestudyonthedifferencesoffishintestinalbacteriafromthreepolyculturepatterns.TheexperimentwasmadebyPCR-DGGE.Throughtheexperiment,theDGGEprofilesofthefishintestinalbacteriafromthreepolyculturepatternswasmade,observingthedifferencesofthediversityoffis

7、hintestinalbacteria.Afterfourmonths’cultivationanddataanalysis,theanalysisofPCR-DGGEfingerprintingstructureandsomespecificsequenceofPCR-DGGEbandsshowedthattherewerehighersimilaritiesofGrasscarpintestinalbacteriafromdifferentpatterns(>42.2%),besides,theintestinalbacteriastructu

8、reoftheGrassCarpfedoncompoundfeedandtheSilvercarp,Bigheadcarp

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