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1、松茸對小鼠免疫功能影響的實驗研究王濤1張玲2中元英1、2（通訊作者）李麗娟2（1大理學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院云南大理671000；2大理學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院云南大理671000）【摘要】目的探討松茸醇提取物的水溶液及脂溶液對小鼠免疫功能的影響。方法分別用松茸的水溶液及脂溶液給小鼠灌胃10d后，檢測小鼠免疫器官重量、單核-腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力、淋巴細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化及細(xì)胞因子的情況。結(jié)果胸腺指數(shù)測定和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗陽性。結(jié)論松茸對正常小鼠有免疫增強(qiáng)作用。【關(guān)鍵詞】松茸免疫活性小鼠【中圖分類號】R392【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】20
2、95-1752（2012）01-0237-02松茸因含有肽、出類以及多種酶類，被日木人成為“菇中之王”［1］。研究表明野生松茸可能增強(qiáng)機(jī)體免疫功能［2］。木研究擬通過采集云南野生松茸的水提劑和醇提劑為受試藥物進(jìn)行小鼠的免疫活性測定，檢測其免疫功能及其可能的機(jī)制，現(xiàn)報道如下：一、材料和方法（一）材料1.受試藥品由大理學(xué)院藥學(xué)院藥物研究所提供的松茸乙醇提取物，提取率為25%?32%之間，使用冷凍法干燥。2.實驗動物由昆明醫(yī)學(xué)院動物中心提供的昆明種小鼠，共計515只，其中雄性259只，雌性256只，4?6周齡,體重18
3、?22g。實驗動物許可證號:scxk（滇）2005-0008。3.主要儀器和試劑（1）主要儀器連續(xù)波長酶標(biāo)儀（PowerwaveXS,美國），C02培養(yǎng)箱（SANYO,日本），恒溫水浴箱（DKB-600B型，上海一恒科學(xué)儀器有限公司），電子天平（天J42003，上海上平儀器公司），臺式離心機(jī)（Mini-6K,杭州奧盛儀器有限公司），低速離心機(jī)（LC-4012,科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司）。（2）主要試劑二甲基亞砜DMS0（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，批號:070707）,注射用環(huán)磷酰胺（山西普德藥業(yè)有限公
4、司，批號：20100307），乙醚（山西楊林工業(yè)開發(fā)區(qū)汕滇藥業(yè)有限公司，批號：101030）,小牛血清（北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司，批號:20100303），RPM1-1640（1nvitrogen公司，批號：1313945），植物血凝素PHA（SolarbioLifesciences,批號：P8090）,四唾哇鹽（MTT,又稱四甲基偶氮唑鹽｝。MouselL-2ELISA檢測試劑盒（Quantikine,批號：281038），MouseTNFαEUSA檢測試劑盒（Quantikine,批號：28
5、2254）。（二）方法1.實驗分組松茸（SR）樣品溶解吋使用超純水（ddH20）和二甲基亞砜（DMSO）兩種溶劑。140只小鼠分為14個小組，每組10只。分組情況為：SR水溶組（200mg/kg）,SR脂溶組（200mg/kg），SR+CTX水溶組（200mg/kg+40mg/kg），SR+CTX脂溶組（200mg/kg+40mg/kg）,每個大組根據(jù)性別分為雌雄兩個小組，另設(shè)溶劑對照組DMSO（20ml/kg）和ddH20（20ml/kg）各有雌雄兩個小組,環(huán)磷酰胺陽性對照組（CTX,40mg/kg）,雌雄兩個
6、小組。各組分別灌胃1次/d,連續(xù)10d后檢査松茸提取物對小鼠免疫器官、巨噬細(xì)胞吞噬功能、淋巴細(xì)胞增殖情況、細(xì)胞因子（IL-2,TNFα）的影響。2.檢測方法2.1臟器/體重比值測定：小鼠頸椎脫臼處死稱重后，立即取出胸腺和脾臟，用濾紙吸干血液后稱重，胸腺（脾）指數(shù)單位：胸腺（脾）質(zhì)量/小鼠體質(zhì)量（mg/10g）。2.2吞噬功能：處死動物前3d，以5%的淀粉肉湯啟動小鼠巨噬細(xì)胞，采用半體內(nèi)法檢測腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能，以100個巨噬細(xì)胞中吞噬酵母菌的巨噬細(xì)胞數(shù)（吞噬率）及每個巨噬細(xì)胞吞噬酵母菌的個數(shù)（吞噬指
7、數(shù)）作為評價指標(biāo)。2.3T淋巴細(xì)胞增殖測定（MTT法）：無菌取出脾臟，制成脾細(xì)胞懸液，用RPM11640不完全營養(yǎng)液洗漆3次，1000r/min離心10min,然后用完全營養(yǎng)液配成l×107/mI。取100μl加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)（每孔l×106個細(xì)胞，每個樣品做3個復(fù)孔）。再加入240mg/L的PHA20μl（使終濃度為40mg/L,同時設(shè)不加PHA的對照孔），置37°C、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h后，每孔加入10μIMTT溶液（5g/L）,再繼續(xù)培養(yǎng)4h,離心，棄
8、上清液，然后加入30%DMS0100μl,充分振蕩后靜置20min,用酶標(biāo)儀于波長570nm處測A值。2.4細(xì)胞因子的檢測將動物用乙醚麻醉以后，摘眼球取血。將血液靜置離心后，獲得血清，測IL-2,TNF&alPha;得指標(biāo)，具體按試劑盒說明操作步驟進(jìn)行。1.統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。顯著性檢驗水準(zhǔn)為α=0.05。二、結(jié)果及討論
