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《磁分離酶聯(lián)免疫熒光法（meif）檢測人血清中胰島素》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、磁分離酶聯(lián)免疫熒光法（MEIF）檢測人血清中胰島素：謝晶,劉振世,胡珊,蔡汝秀,楊海,楊祥良【摘要】 目的:采用磁微粒分離酶聯(lián)免疫熒光（MEIF）分析技術(shù)建立一種簡便、高敏感性、定量檢測人血清胰島素(insulin)的新方法。方法:選用2株識別人胰島素不同表位的單克隆抗體(mAb)。一株mAb用異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記,另一株用堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記;偶聯(lián)羊抗FITC抗體的磁珠用作固相分離載體,4-甲基磷酸傘型酮用作熒光底物。結(jié)果:成功建立了定量檢測人血清胰島素的MEIF,靈敏度2.0μIu/mL,線形范圍0～188.52
2、μIu/mL,批內(nèi)變異系數(shù)(CV)為4.3%～5.2%,批間CV為2.6%～9.5%,稀釋回收率為93%～117%,加標(biāo)回收率為94%～113%。實際樣品的測定結(jié)果與倍愛康公司商品化人insulin磁分離發(fā)光系統(tǒng)檢測試劑盒的檢測結(jié)果比較,具有良好的相關(guān)性。結(jié)論:MEIF定量測定人insulin方法成本低、靈敏度高、穩(wěn)定性好,在臨床免疫檢測領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景?！娟P(guān)鍵詞】酶聯(lián)免疫分析免疫熒光4-甲基磷酸傘型酮磁珠胰島素 ［Abstract］AIM:Toestablishaconvenientandsensitivemagicse
3、parationenzymeimmunofluorescence(MEIF)methodfordetectinghumaninsulin.METHODS:Tonoclonalantibodies(mAbs)agicsolidphaseseparation.Magicbeadsbelliferyl-phosphoricacid(4-MUP)L,thelinearrange0μIu/mLto188.52μIu/mL,andtheintra-assayvariationandinter-assayvariationagicenzymec
4、hemiluminescenceimmunoassaysystem.CONCLUSION:TheMEIFfordetectinginsulinislomunedetection. ?。跭eyeimmunoassay;immunofluorescence;4-Methylum-belliferyl-phosphoricacid;magicbeads;insulin 糖尿病是我國最常見的內(nèi)分泌疾病,發(fā)病率約為1.3‰,我國每年約有2.7萬新增患者。糖尿病給患者家庭和社會帶來巨大的經(jīng)濟損失（每年高達100億人民幣）和沉重的精神傷害［1
5、］。隨著人們生活水平的提高和生活方式的改變,糖尿病發(fā)病趨于年輕化［2］。血清胰島素（insulin）含量測定是糖尿病診斷和治療過程中重要的血清檢查項目,對于糖尿病的診斷和治療具有重要意義。常規(guī)檢測胰島素的方法主要有放射免疫法和酶聯(lián)免疫吸附法等,但存在著放射污染或靈敏度低,操作復(fù)雜等不足。本研究旨在建立一種檢測人血清胰島素的新方法-磁分離酶免疫熒光法(magicenzymeimmunofluorescence,MEIF),實現(xiàn)對人血清胰島素的定量、敏感和快速檢測?！ ?材料和方法 1.1材料4-甲基磷酸傘型酮（4-MUP）購自Si
6、gma公司。磁分離試劑、洗液、胰島素標(biāo)準(zhǔn)品及抗人胰島素單克隆抗體（mAb）FITC和AP連接物由北京倍愛康生物技術(shù)有限公司提供。二乙醇胺（DEA）和三乙醇胺（TEA）購自Fluka公司。VictorⅢ型熒光檢測儀為珀金埃爾默(PerKinElmer)公司產(chǎn)品。專用于酶標(biāo)板的磁分離器為自行研制。恒溫箱為上海實驗儀器公司產(chǎn)品。白色未標(biāo)記酶標(biāo)板為GreinerMicrolon生產(chǎn)。 1.2方法 1.2.1mAb標(biāo)記物的工作濃度選擇將倍愛康公司提供的FITC標(biāo)記抗人胰島素mAb1和AP標(biāo)記mAb2,用TRIS緩沖液稀釋至不同濃度,以檢
7、測靈敏度高、非特異結(jié)合低為原則［3］選擇標(biāo)記抗體的最佳工作濃度?！ ?.2.2探索MEIF檢測人胰島素的最佳條件通過對AP催化4-MUP反應(yīng)條件的探索、優(yōu)化;對各種檢測條件如標(biāo)準(zhǔn)品、磁分離試劑、熒光底物和標(biāo)記抗體用量,溫育時間等條件進行全面探索后確定檢測的最佳條件?！ ?.2.3MEIF檢測人胰島素方法的性能評價通過實驗對本檢測方法的靈敏度、線形范圍、回收率、測定血清穩(wěn)定性等進行了評價,并與倍愛康生物技術(shù)公司人胰島素試劑盒比較,明確該方法與現(xiàn)有商品化檢測試劑盒的相關(guān)性?！ ?結(jié)果 2.1熒光的動力學(xué)性質(zhì)在AP和4-MUP熒光體系
8、中,將不同濃度的AP加入熒光底物中,熒光強度(FLI)隨AP的濃度和反應(yīng)時間而變化。FLI隨反應(yīng)的時間延長而增強。AP濃度在1mg/L時,反應(yīng)較快,180S左右,FLI接近峰值,隨后開始緩慢下降;但濃度低10個數(shù)量級以下時,反應(yīng)10min,FLI還
