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1、綠蘿葉片和莖段離體愈傷組織培養(yǎng)及繼代培養(yǎng)三組實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1)通過(guò)本次實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步熟悉配制培養(yǎng)基的流程及操作中應(yīng)注意的事項(xiàng),學(xué)會(huì)設(shè)計(jì)和篩選綠蘿愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方。(2)通過(guò)本次實(shí)驗(yàn),能夠熟練掌握外植體的表面消毒技術(shù)和無(wú)菌操作技術(shù)。(3)通過(guò)本次實(shí)驗(yàn),能夠熟練掌握愈傷組織繼代培養(yǎng)的基本操作技術(shù),進(jìn)一步熟悉、規(guī)范無(wú)菌操作技術(shù)。2、實(shí)驗(yàn)流程配置綠蘿葉片和莖段愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基——?接種綠蘿葉片和莖段誘導(dǎo)愈傷組織產(chǎn)生——?配罝綠蘿葉片和莖段愈傷組織增殖培養(yǎng)基——?接種綠蘿葉片和莖段愈傷組織進(jìn)行增殖——?實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察記錄3、實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料(1)實(shí)驗(yàn)用具和儀器冰箱
2、、普通天平、三角瓶、移液管、量筒、燒杯、容量瓶、玻璃棒、陶瓷缸、精密pH試紙(pH5.4~7.0)、藥勺、稱量紙、標(biāo)簽紙、封口膜、橡皮筋、棉線、電爐、高壓蒸汽滅菌鍋、電磁爐等。酒精棉球、小塊紗布、己火菌濾紙、槍狀鑷子、手術(shù)剪、解剖刀、已火菌培養(yǎng)皿、酒精燈、超凈工作臺(tái)、恒溫培養(yǎng)箱、100ml三角瓶、1000ml搪瓷杯、50ml量筒、1ml、2ml、5ml、10ml吸管等。(2)藥品和試劑:MS培養(yǎng)基母液配制試劑、瓊脂、蔗糖、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、蒸餾水、lmolClHCl、lmol-L_1NaOH>綠蘿葉片和莖段組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基、無(wú)菌水、75%酒精、0.l%HgCl2,、愈傷組織
3、繼代培養(yǎng)基、蒸餾水等。(3)材料:綠蘿葉片和莖段4、外植體選擇綠蘿,屬天南星科,是常綠藤植物。枝繁葉茂,嫩綠有光澤,有極好的觀賞價(jià)值。還能吸附和去除室內(nèi)空氣中的甲醛、苯、三氯乙烯等污染物,是天然的“空氣凈化器”。葉片光滑無(wú)絨毛,用作植物組培外植體時(shí)消毒較容易。5、培養(yǎng)基及配制綠蘿葉片誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基:MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L綠蘿莖段誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基:1/2MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.4mg/L+2,4_D0.8mg/L愈傷組織分化的培養(yǎng)基:MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L生根培養(yǎng)基:1/2MS+6-BA0
4、.1mg/L+IBA0.2mg/L(一)大量元素母液制備表1MS培養(yǎng)基大量元素母液制備序號(hào)藥品名稱培養(yǎng)基濃度(mg/L)擴(kuò)大20稱量(mg)1NH漏1650330002KNO,190038000蒸榴水定3CaCl2?211,04408800容至綠蘿葉片和莖段離體愈傷組織培養(yǎng)及繼代培養(yǎng)三組實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1)通過(guò)本次實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步熟悉配制培養(yǎng)基的流程及操作中應(yīng)注意的事項(xiàng),學(xué)會(huì)設(shè)計(jì)和篩選綠蘿愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方。(2)通過(guò)本次實(shí)驗(yàn),能夠熟練掌握外植體的表面消毒技術(shù)和無(wú)菌操作技術(shù)。(3)通過(guò)本次實(shí)驗(yàn),能夠熟練掌握愈傷組織繼代培養(yǎng)的基本操作技術(shù),進(jìn)一步熟悉、規(guī)范無(wú)菌
5、操作技術(shù)。2、實(shí)驗(yàn)流程配置綠蘿葉片和莖段愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基——?接種綠蘿葉片和莖段誘導(dǎo)愈傷組織產(chǎn)生——?配罝綠蘿葉片和莖段愈傷組織增殖培養(yǎng)基——?接種綠蘿葉片和莖段愈傷組織進(jìn)行增殖——?實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察記錄3、實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料(1)實(shí)驗(yàn)用具和儀器冰箱、普通天平、三角瓶、移液管、量筒、燒杯、容量瓶、玻璃棒、陶瓷缸、精密pH試紙(pH5.4~7.0)、藥勺、稱量紙、標(biāo)簽紙、封口膜、橡皮筋、棉線、電爐、高壓蒸汽滅菌鍋、電磁爐等。酒精棉球、小塊紗布、己火菌濾紙、槍狀鑷子、手術(shù)剪、解剖刀、已火菌培養(yǎng)皿、酒精燈、超凈工作臺(tái)、恒溫培養(yǎng)箱、100ml三角瓶、1000ml搪瓷杯、50ml量筒
6、、1ml、2ml、5ml、10ml吸管等。(2)藥品和試劑:MS培養(yǎng)基母液配制試劑、瓊脂、蔗糖、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)、蒸餾水、lmolClHCl、lmol-L_1NaOH>綠蘿葉片和莖段組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基、無(wú)菌水、75%酒精、0.l%HgCl2,、愈傷組織繼代培養(yǎng)基、蒸餾水等。(3)材料:綠蘿葉片和莖段4、外植體選擇綠蘿,屬天南星科,是常綠藤植物。枝繁葉茂,嫩綠有光澤,有極好的觀賞價(jià)值。還能吸附和去除室內(nèi)空氣中的甲醛、苯、三氯乙烯等污染物,是天然的“空氣凈化器”。葉片光滑無(wú)絨毛,用作植物組培外植體時(shí)消毒較容易。5、培養(yǎng)基及配制綠蘿葉片誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基:MS+6-BA3.0mg
7、/L+NAA0.3mg/L綠蘿莖段誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基:1/2MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.4mg/L+2,4_D0.8mg/L愈傷組織分化的培養(yǎng)基:MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L生根培養(yǎng)基:1/2MS+6-BA0.1mg/L+IBA0.2mg/L(一)大量元素母液制備表1MS培養(yǎng)基大量元素母液制備序號(hào)藥品名稱培養(yǎng)基濃度(mg/L)擴(kuò)大20稱量(mg)1NH漏1650330002KNO,190038000蒸榴水定3CaCl2?211,04408800容至4MgSO.,?7H2O37074001000ml5KH2PO,17