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《山莨菪堿對(duì)脂多糖結(jié)合血管內(nèi)皮細(xì)胞及誘導(dǎo)no合成的》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、山莨菪堿對(duì)脂多糖結(jié)合血管內(nèi)皮細(xì)胞及誘導(dǎo)NO合成的【關(guān)鍵詞】山莨菪堿 關(guān)鍵詞:山莨菪堿;內(nèi)皮，血管;脂多糖類;一氧化氮 摘要:目的實(shí)驗(yàn)觀察山莨菪堿對(duì)細(xì)菌脂多糖（LPS）結(jié)合血管內(nèi)皮細(xì)胞膜及誘導(dǎo)NO生成的影響.方法體外分離培養(yǎng)牛主動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞，用免疫組化顯色反應(yīng)顯示細(xì)菌脂多糖與血管內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)合，并通過(guò)圖像分析對(duì)結(jié)果進(jìn)行半定量;用高壓液相色譜分析細(xì)胞培養(yǎng)液中NO3-的含量，間接反應(yīng)NO的生成水平.結(jié)果細(xì)胞分組處理，間接法顯色后圖像分析，結(jié)果表明山莨菪堿組的平均灰度值明顯低于LPS組（P<0.05）;并且對(duì)細(xì)
2、胞培養(yǎng)液中NO3-的檢測(cè)顯示山莨菪堿組的濃度明顯低于LPS組（P<0.05）.結(jié)論山莨菪堿能夠抑制LPS結(jié)合血管內(nèi)皮細(xì)胞，并且能夠抑制LPS對(duì)NO合成的誘導(dǎo)作用. Keyine;endothelium，vascular;lipopolysac-charides;nitricoxide Abstract:AIMToinvestigatetheeffectofanisodamineonlipopolysaccharidesattachedtothemembraneofendotheliumandinducing
3、thereleasingofnitricoxide（NO）.METHODSThebovineaorticendothelialcells（BAEC）embraneofendothelium-munocytochemistricmeans.TheNO3-levelediuminedbyhigh-performanceliquidchromatography.RESULTSAf-terbeingtreatedineshoineineinecansignificantlyinhibittheLPSattachedtothe
4、membraneofendotheliumandinducingthereleasingofNO. 0引言 研究與臨床實(shí)踐證明大劑量的山莨菪堿對(duì)于搶救內(nèi)毒素休克有效，其研究的結(jié)果表明其抗休克的作用機(jī)制主要在細(xì)胞水平上.近年對(duì)大腸桿菌脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）識(shí)別結(jié)合細(xì)胞膜上受體，引發(fā)各種病理生理過(guò)程的研究日漸深入.本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)體外培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞，觀察山莨菪堿對(duì)LPS結(jié)合血管內(nèi)皮細(xì)胞膜上受體以及誘導(dǎo)NO合成的影響，以此進(jìn)一步揭示山莨菪堿抗內(nèi)毒素休克的作用機(jī)制. 1材料和方法 1
5、.1材料 ?、偎幤放c試劑:Ⅰ型膠原酶;正辛胺（n-octylamine）;大腸桿菌脂多糖E.coilO11B4（lipopolysaccharides，LPS，美國(guó)Sigma公司）;RPMT-1640培養(yǎng)基（美國(guó)Gibco公司）;抗LPS單克隆抗體參照馬越云等［1］建立的方法制備;Ⅷ因子相關(guān)抗原抗體與CD14單克隆抗體（武漢博士德生物技術(shù)公司）;辣根過(guò)氧化酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG抗體（華美生物工程公司）;鹽酸消旋山莨菪堿（蕪湖長(zhǎng)江藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)9806192）.地塞米松（天津藥業(yè)有限公司）;②儀器設(shè)
6、備:高壓液相色譜儀（美國(guó)Beckman公司）;CMIAS系列-多功能彩色病理圖像分析系統(tǒng)（北京航空航天大學(xué)圖像中心）. 1.2方法 ?、偌?xì)胞培養(yǎng)與鑒定:無(wú)菌條件下取牛主動(dòng)脈血管10～15cm，管腔注入1gL-1Ⅰ型膠原酶，37℃消化20min，收集消化液，離心洗滌細(xì)胞2次，計(jì)數(shù)，以1×108L-1細(xì)胞數(shù)接種于含200gL-1小牛血清的1640培養(yǎng)液，5mLL-1CO2，37℃條件下培養(yǎng)，胰酶消化傳代，實(shí)驗(yàn)用6～10代細(xì)胞.培養(yǎng)細(xì)胞用Ⅷ因子相關(guān)抗原單克隆抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性;②內(nèi)皮細(xì)胞膜結(jié)合:LPS-sCD14復(fù)合物的檢測(cè)
7、細(xì)胞均勻爬片，每8張一組，分4組:空白對(duì)照組，LPS組，山莨菪堿組，CD14抗體組.其中山莨菪堿組含山莨菪堿25mgL-1;CD14抗體組含抗CD14單克隆抗體3mgL-1.;除空白對(duì)照組以外，各組的培養(yǎng)液中均含LPS1.0mgL-1.藥物在含200gL-1小牛血清的1640培養(yǎng)液中作用4h后，40gL-1中型甲醛固定細(xì)胞，抗LPS單克隆抗體（50mgL-1）檢測(cè)結(jié)合于細(xì)胞膜上的LPS，用間接法進(jìn)行免疫組化染色，由辣根過(guò)氧化物酶-DAB系統(tǒng)顯色.在CMIAS系列-多功能彩色病理圖像分析儀上進(jìn)行計(jì)算機(jī)輔助圖像分析;③細(xì)
8、胞培養(yǎng)液的處理:細(xì)胞以2×105/孔濃度均勻接種到24孔板中，貼壁生長(zhǎng).每20孔一組分為4組:空白對(duì)照組，LPS組，山莨菪堿組，地塞米松組.其中山莨菪堿組含山莨菪堿50mgL-1;地塞米松組含地塞米松60mgL-1;除空白對(duì)照組以外，各組的培養(yǎng)液中均含LPS10mgL-1.于200mLL-1小牛血清的1640培養(yǎng)液中培養(yǎng).各組分別在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始4，
