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《玄參對(duì)心室重構(gòu)大鼠血管緊張素ⅱ及其1型受體基因表》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、玄參對(duì)心室重構(gòu)大鼠血管緊張素Ⅱ及其1型受體基因表【摘要】 目的探討玄參對(duì)心室重構(gòu)大鼠血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）及其1型受體基因表達(dá)（AT1AmRNA)的影響。方法采用甲狀腺素致大鼠心室重構(gòu)及腹主動(dòng)脈不完全結(jié)扎致大鼠心室重構(gòu)兩種動(dòng)物模型，觀察玄參對(duì)心臟指數(shù)（heartRNA）表達(dá)水平的影響。結(jié)果與模型組相比，玄參可顯著降低動(dòng)物HethodsTodelingmodelsinalaorticstenosisinrats.TheheartRNAexpressioninedafteraperiodofXuanshenadministration.Re
2、sultsparedodelingrats,theH9700）；電泳儀（復(fù)旦科技，型號(hào)：FR-250）；凝膠成像（上海天能科技有限公司，型號(hào)：Tanon2500）；Biohit移液槍、Eppendorf移液槍?！ ?.3藥品試劑 玄參（批號(hào)：060913），產(chǎn)地浙江，上海養(yǎng)和堂中藥飲片有限公司；L-甲狀腺素（L-Thy）（產(chǎn)品批號(hào)：1131479），Sigma公司；卡托普利（批號(hào)：060804），上海衡山藥業(yè)有限公司；血管緊張素Ⅱ試劑盒（批號(hào)：20061230），北京北方生物技術(shù)研究所；考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒（批號(hào)：20070104），
3、南京建成試劑公司；醛固酮放免試劑盒（批號(hào)：061220），北京北方生物技術(shù)研究所；2×PCRMasterMix（批號(hào)：2007040822），上海欣百諾生物科技有限公司；RevertAidtTMFirstStrandcDNASynthesisKit,K1622（批號(hào)：00022047），F(xiàn)ermentas公司，上海中晶代理?！ ?.4玄參藥液制備玄參用8倍量水煎煮3次，每次微沸30min，合并濾液濃縮，冷藏備用。實(shí)驗(yàn)用量按每千克給予的生藥量計(jì)算?！ ?.5模型制備及分組給藥 1.5.1抗L-甲狀腺素致大鼠心室重構(gòu)觀察選用220～250g的
4、雄性SD大鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為：正常組、模型組、卡托普利組、玄參小劑量組和玄參大劑量組。除正常組外，各組連續(xù)7d腹腔注射L-甲狀腺素0.25mg·kg-1·d-1，1次/d，造成心室重構(gòu)模型；正常組腹腔注射等量生理鹽水。各給藥組在給予L-甲狀腺素后灌胃給予卡托普利40mg·kg-1或玄參水煎液13.5，27g·kg-1；正常組、模型組灌胃給予等量蒸餾水。連續(xù)灌胃給藥9d后，于處理前禁食不禁水12h，然后取血和心肌進(jìn)行各項(xiàng)分析。大鼠心肌肥厚指數(shù)的測(cè)定：大鼠稱體重（Bg,加入2ml生理鹽水在冰浴環(huán)境中快速勻漿，3500r·
5、min-1離心10min，取上清200μl加生理鹽水800μl，制備成2%的心肌組織勻漿，按血管緊張素Ⅱ試劑盒說(shuō)明書(shū)及考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)試盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作測(cè)定AngⅡ及蛋白濃度。結(jié)果以每毫克蛋白中的AngⅡ含量表示?！ ?.5.2抗腹主動(dòng)脈縮窄致大鼠心室重構(gòu)觀察大鼠用戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔注射麻醉，仰位固定，打開(kāi)腹腔，鈍性分離腹主動(dòng)脈，用內(nèi)徑為0.5mm的銀夾不完全結(jié)扎左右腎動(dòng)脈之間的腹主動(dòng)脈，使之外徑狹窄至0.5mm，制備壓力超負(fù)荷性心室重構(gòu)模型。假手術(shù)組動(dòng)物僅分離腹主動(dòng)脈后不做結(jié)扎。術(shù)后肌肉注射青霉素1×104U·kg-1·d-1,
6、共3d,預(yù)防感染?！ ≡炷：?周手術(shù)組大鼠隨機(jī)分組，每組10只。給藥1次/d，連續(xù)給藥8周。玄參小劑量組灌胃給予玄參水煎液13.5g·kg-1；玄參大劑量組灌胃給予玄參水煎液27g·kg-1；卡托普利組灌胃給予卡托普利水溶液40mg·kg-1；假手術(shù)組和模型組大鼠灌胃給予等量蒸餾水?！ ⌒呐K指數(shù)：給藥8周后，動(dòng)物稱重，頸動(dòng)脈取血處死后，快速打開(kāi)胸腔，分離心臟稱重如前“大鼠心肌肥厚指數(shù)的測(cè)定”項(xiàng)下所述?！ ⌒募〗M織AngⅡ含量測(cè)定:取大鼠的心肌組織測(cè)AngⅡ含量，步驟如前“心肌組織AngⅡ含量測(cè)定”項(xiàng)下所述。血清醛固酮（ALD）含量測(cè)定：取血
7、，靜置1h后，3500r/min離心10min取上清液，按醛固酮試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。心肌組織AngⅡ受體1型基因（AT1AmRNA）的表達(dá)水平觀察：提取總RNA及逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng):每組取5個(gè)心肌標(biāo)本，每個(gè)約100mg，Trizol試劑盒提取總RNA，取2μg總RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，－20℃保存。所有引物均由上海生物工程技術(shù)有限公司合成。表1β-actin，AT1A引物序列（略）PCR反應(yīng)：以稀釋10倍后的cDNA為模板，用目的基因引物進(jìn)行PCR反應(yīng)，同時(shí)設(shè)β-actin作為內(nèi)參，并根據(jù)實(shí)測(cè)的基因的mRNA豐度建立最佳循環(huán)數(shù)，優(yōu)化反應(yīng)條件。在
8、冰上配制如下反應(yīng)體系。見(jiàn)表2。表2PCR反應(yīng)體系配制表（略）配制完畢，放入PCR儀中進(jìn)行如下反應(yīng)：95℃預(yù)變性5min；進(jìn)行29個(gè)循環(huán)：95℃變性30s；55℃退火30s；72℃
