舒肝驅毒方對hsc活化增殖及其相關細胞因子作用的研究

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1、分巧號Ｒ２４學校代號１（＾２？ＵＰＣ６１０巧級學號２０１３２４５０５６１■種＠／【中虔為夫嗦ＧｕａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ博±學位論文（港巧臺、境外生）舒巧驅毒方對ＨＳＣ活化增殖及其￣相關細胞因子作用的研究學位申請人江育淸指導教師姓名王新華專業(yè)名稱中醫(yī)臨床基礎申請學位類型科學學位論文提交日期２０１６年４月■■■＇Ｖ．－．＂■－．？、．．＂－Ｉ，：’如：

2、＾—Ｖ＇苗；附：廣州中醫(yī)藥大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學位論文，是個人在導師的指導下，獨立進行研巧工作所取得的成果。除文中己經(jīng)特別加Ｗ注明引用的內容外，本論文不含任何其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研巧做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中Ｗ明確方式標明并致謝。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。學位論文作者簽名＾曰期：ＺＣ《年ｙ月作曰關于學位論文使用授權的聲明本人完全了解廣州中醫(yī)藥大學有關保留使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留或向國家有關部口機

3、構送交論文的復印件和電子版，允許被查閱和借閱。本人授權廣州中醫(yī)藥大學可Ｗ將本學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可Ｗ采用影印、縮印或其他復印手段保存和匯編本學位論文。（保密論文在解密后應遵守此規(guī)定）乃論文作者簽名＾論文導師＾曰期：年月／方曰中文摘要肝纖維化是一切慢性肝病共同的病理學基礎，是涉及多種細胞、細胞因子、細胞外基質巧ｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）及其降解酶類、細胞調亡等多個復雜因素的病理生理過程。各種因素之間相互影響、相互交錯，形成肝纖維化的動態(tài)變化網(wǎng)

4、絡，而肝星狀細胞州巧ａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌ，胎Ｃ）的激活是這個復雜網(wǎng)絡的中也環(huán)節(jié)。巨ＣＭ成分合成和降解的失衡是導致肝組織重構、發(fā)生纖維化的直接原因，異常激活的ＨＳＣ是ＥＣＭ的主要來源，細胞因子及多肋類生長因子等調控因子是啟動、調節(jié)ＨＳＣ生物學行為的重要因素，細胞調亡是機體自身平衡ＨＳＣ數(shù)量和功能的主要手段。肝星狀細胞一（ＨＳＣ）是肝臟中的種非實質細胞，位于Ｄｉｓｓｅ間隙內，形態(tài)不規(guī)則，胞體呈卵圓形，胞質富含維生素Ａ脂滴，核周部分包埋在鄰近肝細胞的隱窩內，其對肝臟的ＥＣＭ產生、生長因子合成、

5、基質重建Ｗ及竇孔改變等生理過程均可產生影響。研究發(fā)現(xiàn)，多種細胞、細胞因子、ＥＣＭ和非狀類介質（如乙醇、活性氧等）參與胎Ｃ的激活和肝纖維化。Ｗ往的中醫(yī)藥學記錄了很多的單味中藥和中藥復方，能夠間接或直接地保護肝臟一，治巧肝纖維化。作為治療肝纖維化的篩選藥物，自擬方舒肝驅毒方是個很好的選擇，其中有許多原因：舒肝驅毒方中柴胡、山甲珠、丹參、赤巧、Ｈ古粉舒肝解郁，益氣養(yǎng)陰，調理氣血，涼血化療；白巧養(yǎng)肝柔肝；絞股藍、紅景天、虎杖、茵陳、巧《等清熱解毒一、化濕巧濁。故舒肝驅毒方的開發(fā)和應用空間有待進步挖掘。硏究目

6、的研究舒肝驅毒方對ＨＳＣ的活化增殖及相關細胞因子網(wǎng)絡的作用，Ｗ期揭示舒肝驅毒方抗纖維化的分子機制。研究方法１舒肝驅毒方對ＨＳＣ増殖及分泌ＥＣＭ的影響－１．１繪制ＨＳＣＴ６的自然生長曲線將液氮中凍存的Ｈ－ＳＣＴ６細胞株進行復蘇，在恒溫箱中，培養(yǎng)到細胞呈單層致密狀－時，用膜蛋白酶消化之后，進行傳代，在細胞生長穩(wěn)定后，用ＭＴＴ的方法，繪制ＨＳＣＴ６的生長曲線。－１ＨＳＣ．２舒肝驅毒方對Ｔ６増殖的影響細胞培養(yǎng)方法同前面，分別加入舒肝驅毒方高劑量、中劑量、低劑量組，用ＭＴＴ法，檢測細胞生長情況。

7、１．３舒肝驅毒方對ＥＣＭ合成的影響Ｉ－采用逆轉錄聚合酶鏈式反應（ＲＴＰＣＲ）檢測Ｉ、ＩＩＩ型膠原ｍＲＮＡ，酶聯(lián)免疫法（ＥＬＩＳＡ）和放射免疫法（ＲＩＡ）分別檢測Ｉ型膠原和透明質酸含量。２舒肝驅毒方對相關細胞因子網(wǎng)絡的調節(jié)作用２－．１舒肝驅毒方對轉化生長因子（ＴＧＦ）目１的抑制作用－－Ｔ６細胞ＴＧＦ－－－舒肝驅毒方對ＨＳＣ目ＩｍＲＮＡ的影響用ＲＴＰＣＲ檢測，對ＨＳＣＴ６細胞ＴＧＦｓ－目１蛋白的影響用ＷｅｔｅｒｎＢｌｏｔ法檢測，對ＴＧＦ目１受體的影響采用流式細胞技術檢測。－－ｍＲＮＡ舒肝驅毒方對ＴＧ

8、Ｆ目１的下游效應遞質結締組織生長因子（ＣＴＧＦ）的影響用ＲＴＰＣＲｎＨＳＣＴＧＦ－－檢測。對Ａｇｌｌ刺激活化ｅＩｍＲＮＡ的抑制作用用ＲＴＰＣＲ檢測，對Ａｎｇｌｌ刺激ＨＳＣ－活化堿性成纖維生長因子（ｂＦＧＦ）表達的抑制作用用免疫組化法檢測。