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《western轉(zhuǎn)膜條件》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、WORD格式可編輯western轉(zhuǎn)膜條件蛋白來(lái)源：RAW264.7總蛋白蛋白名稱(chēng)（可保密）：一些轉(zhuǎn)錄因子蛋白分子量：40~70KDWB用膜類(lèi)型、孔徑：0.45NC轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)恒流400mA轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60~90minPS.其實(shí)吧，以我的經(jīng)驗(yàn)來(lái)看，除非目的蛋白特別小，或者特別大，不然轉(zhuǎn)膜時(shí)間真的不是那么重要，?曾經(jīng)因?yàn)槭д`，轉(zhuǎn)了15min就拆下來(lái)了，但從麗春紅染色來(lái)看，跟平常實(shí)驗(yàn)也沒(méi)有太大的區(qū)別。蛋白來(lái)源：內(nèi)皮細(xì)胞總蛋白蛋白名稱(chēng)（可保密）：occludin&AKT蛋白分子量：65KD&56KDWB用膜類(lèi)型、孔徑：0.45PVDF轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕
2、轉(zhuǎn)恒壓100V轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60~70min設(shè)備名字是“Bio-Radmini”。?蛋白來(lái)源：乳鼠心肌細(xì)胞和成年鼠心肌組織總蛋白和核蛋白蛋白名稱(chēng)（可保密）：保密蛋白分子量：65KD&55KDWB用膜類(lèi)型、孔徑：PVDF（預(yù)先用甲醇處理）轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：半干轉(zhuǎn)恒壓12V轉(zhuǎn)膜時(shí)間：30-40min設(shè)備：“Bio-Radmini”建議：最開(kāi)始做過(guò)濕轉(zhuǎn)（過(guò)夜的那種），太費(fèi)事費(fèi)時(shí)，效果也不如半干轉(zhuǎn)。?蛋白來(lái)源：293T細(xì)胞蛋白名稱(chēng)（可保密）：蛋白分子量：95KD&35KDWB用膜類(lèi)型、孔徑：PVDF轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)恒壓90V-110V，控制電流不要超過(guò)300m
3、A。轉(zhuǎn)膜時(shí)間：70min?蛋白來(lái)源：腫瘤手術(shù)標(biāo)本蛋白名稱(chēng)（可保密）：轉(zhuǎn)錄因子蛋白分子量：33KDaWB用膜類(lèi)型、孔徑：PVDF膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：350mA恒流轉(zhuǎn)膜時(shí)間：150min專(zhuān)業(yè)技術(shù)資料分享WORD格式可編輯轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-Rad說(shuō)明：相同條件曾用于數(shù)個(gè)30-70KDa的蛋白，都能成功轉(zhuǎn)上，不過(guò)沒(méi)有試縮短時(shí)間效果如何；?實(shí)驗(yàn)時(shí)沒(méi)為轉(zhuǎn)膜條件苦惱，倒是電泳時(shí)膠的濃度及時(shí)間根據(jù)不同分子量而有區(qū)別。蛋白來(lái)源：成纖維細(xì)胞蛋白名稱(chēng)（可保密）：smad3蛋白分子量：54KDaWB用膜類(lèi)型、孔徑：PVDF膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：350mA恒流轉(zhuǎn)膜時(shí)間：150m
4、in轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-Rad?蛋白來(lái)源：胰腺癌細(xì)胞蛋白名稱(chēng)（可保密）：蛋白分子量：16KDaand42KDaWB用膜類(lèi)型、孔徑：PVDF膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：120V恒壓轉(zhuǎn)膜時(shí)間：90min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-Rad蛋白來(lái)源：大鼠血管平滑肌細(xì)胞蛋白名稱(chēng)（可保密）：保密蛋白分子量：72KD，42KD和22KDWB用膜類(lèi)型、孔徑：一般的PVDF膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)，恒流一張膜0.26A，兩張膜0.3A。轉(zhuǎn)膜時(shí)間：90min設(shè)備：“Bio-Radmini”建議：轉(zhuǎn)膜緩沖液最多用3次，最好現(xiàn)用現(xiàn)配，我們用的沒(méi)有加SDS，轉(zhuǎn)的時(shí)候最好能用冰塊一類(lèi)的東西降一
5、下溫，這樣轉(zhuǎn)的效果要好一些，轉(zhuǎn)的時(shí)候一定要把三明治每層之間的氣泡除去，同時(shí)使濾紙大于膜，膜大于膠，以免燒壞電極。?蛋白來(lái)源：大鼠PBMC蛋白名稱(chēng)（可保密）：保密蛋白分子量：55KDWB用膜類(lèi)型、孔徑：0.22的PVDF膜轉(zhuǎn)膜方式（恒流）：濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜時(shí)間：60-90min設(shè)備：“Bio-Radmini”建議：轉(zhuǎn)膜液用過(guò)兩三次之后轉(zhuǎn)膜效果就很差了其它按照常規(guī)就好了??其實(shí)0.22的膜一般不怕轉(zhuǎn)過(guò)頭以我們的經(jīng)驗(yàn)，轉(zhuǎn)膜時(shí)間、電壓其實(shí)?也有很大范圍的調(diào)整，并不是非要固定于哪一個(gè)最合適，曾經(jīng)做過(guò)??一張膜轉(zhuǎn)，17KD的和170KD的，按照170KD的條件，17KD的轉(zhuǎn)膜也很好的。
6、蛋白來(lái)源：人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系專(zhuān)業(yè)技術(shù)資料分享WORD格式可編輯蛋白名稱(chēng)（可保密）：保密蛋白分子量：大于250kDWB用膜類(lèi)型、孔徑：milliporePVDF膜0.45um轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：濕轉(zhuǎn)，恒流0.3A。轉(zhuǎn)膜時(shí)間：180min設(shè)備：“Bio-Rad”建議：電轉(zhuǎn)保持電壓在70V以上，保持低溫，如果電壓低過(guò)70就需要換緩沖液了。蛋白來(lái)源：白血病細(xì)胞蛋白名稱(chēng)（可保密）：保密蛋白分子量：28KDWB用膜類(lèi)型、孔徑：0.45的NC膜轉(zhuǎn)膜方式（恒流）：濕轉(zhuǎn)，90min，0.25A設(shè)備：“Bio-Rad”建議：海綿厚度要合適，一次轉(zhuǎn)磨用的海綿太薄，導(dǎo)致三明治沒(méi)夾緊，
7、轉(zhuǎn)膜后拿出來(lái)一看，marker都變得七扭八歪。但是有前輩說(shuō)墊的海綿太厚可能將膠壓斷，沒(méi)經(jīng)歷過(guò)，不知道是不是會(huì)有這種情況。?蛋白來(lái)源：腫瘤細(xì)胞蛋白名稱(chēng)（可保密）：磷酸化蛋白蛋白分子量：10-200KDaWB用膜類(lèi)型、孔徑：milliporePVDF膜0.45um轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：120v恒壓轉(zhuǎn)膜時(shí)間：120min轉(zhuǎn)膜設(shè)備：濕轉(zhuǎn)Bio-Rad建議：轉(zhuǎn)膜緩沖液只用2次，基本都轉(zhuǎn)上，5%BSA封閉，減少背景。?蛋白來(lái)源：胰腺β細(xì)胞蛋白名稱(chēng)（可保密）：******蛋白分子量：90-130KDaWB用膜類(lèi)型、孔徑：PVDF膜轉(zhuǎn)膜方式（恒壓、恒流）：250mA恒流轉(zhuǎn)膜時(shí)
