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《角膜急性堿燒傷新鮮羊膜移植后的組織病理學及超微結(jié)》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、角膜急性堿燒傷新鮮羊膜移植后的組織病理學及超微結(jié)【摘要】了解角膜堿燒傷急性期治療中新鮮羊膜移植促進角膜上皮愈合和抑制基質(zhì)浸潤及瘢痕形成的作用。方法：從15只正常新西蘭大白兔中隨機選取3只兔做正常對照，其余12只兔制作雙眼角膜堿燒傷模型，右眼行羊膜移植，左眼為對照。分別于術(shù)后14，30d取材角膜進行PMN（多形核白細胞）計數(shù)，光鏡及透射電鏡觀察。結(jié)果：在炎性細胞浸潤，角膜上皮細胞數(shù)量、形態(tài)、排列及成纖維細胞數(shù)量和細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)方面，新鮮羊膜移植組均優(yōu)于堿燒傷組。結(jié)論：新鮮羊膜移植在角膜堿燒傷急性期治療中具有較強的促進上皮愈合和抑制炎癥及瘢痕形成的作用?！娟P(guān)鍵詞】羊
2、膜移植0引言眼部堿燒傷是常見的眼外傷之一，傳統(tǒng)的治療方法效果不佳，目前羊膜移植治療眼表面疾病成為一個新的方向。本實驗以兔雙眼角膜堿燒傷為實驗模型，右眼實施早期新鮮羊膜移植術(shù)治療，同期對比觀察雙眼的角膜組織結(jié)構(gòu)改變。1材料和方法1.1材料健康新西蘭大白兔15只，體質(zhì)量2.0～2.5kg，雌雄不限，眼表未見異常。隨機選取3只共6眼作正常對照，余12只兔制作雙眼堿燒傷模型，隨機分為兩組（14d組和30d組），24h后右眼行新鮮羊膜移植，左眼為對照。1.2方法新鮮羊膜取自健康剖宮產(chǎn)產(chǎn)婦的胎盤組織，產(chǎn)前血清學檢查排除乙肝、丙肝、梅毒及獲得性免疫缺陷綜合征，取材均在無菌
3、操作下完成。產(chǎn)后立即將胎盤羊膜面用無菌生理鹽水沖洗干凈,自羊膜與絨毛膜之間的潛在空隙鈍性剝離羊膜，使其與絨毛膜分離，后置于4MU/L慶大霉素生理鹽水中，放入4℃冰箱中備用。所制羊膜均于取材后12h內(nèi)使用。倍諾喜眼表面麻醉，置開瞼器，充分暴露眼前段表面，棉簽拭去眼表過多水分，以浸有1mol/LNaOH溶液直徑為6mm的單層圓濾紙片置于兔雙眼角膜表面，60s后取下，建立角膜重度堿燒傷模型，立即用生理鹽水沖洗眼表面及結(jié)膜囊。24h后右眼行羊膜移植，左眼為對照。氯胺酮50mg/kg和異丙嗪25mg/kg1∶1比例混合背部皮下注射4mL進行全身麻醉。沿角膜緣360?觷
4、環(huán)形剪開結(jié)膜，將備好的羊膜片上皮面朝上平鋪于眼表面，其邊緣超出角膜緣2mm，用10-0無損傷縫線間斷縫合，固定于淺層鞏膜使羊膜緊貼于角膜創(chuàng)面，然后將球結(jié)膜縫回至角膜緣，減去周邊多余羊膜，術(shù)畢結(jié)膜囊內(nèi)涂紅霉素眼膏。2.5g/L氯霉素眼藥水點眼，4次/d，于瞼緣縫合2針閉合眼瞼。正常對照組兔于實驗開始時即通過氣體栓塞法處死。實驗兔分別于羊膜移植術(shù)后14，30d采取同法處死，取材角膜組織，分別固定于甲醛或戊二醛固定液中，經(jīng)相應處理后在普通光學顯微鏡下或H-600透射電鏡下觀察并照相。2結(jié)果2.1實驗觀察角膜堿燒傷后立即出現(xiàn)灰白色境界清楚的圓形灼傷區(qū)，局部水腫混濁，
5、次日擴展到整個角膜。堿燒傷組炎癥反應較重,分泌物多,角膜表面粗糙不光滑,有較多壞死組織。角膜緣重度睫狀充血，3～5d后角膜緣即出現(xiàn)新生血管,其后生長迅速，11d新生血管生長旺盛,其頂端分叉,部分交織呈網(wǎng)狀，14d新生血管密集侵入角膜緣內(nèi)約2.65±0.49mm，30d已達角膜中央，約5.33±0.49mm，角膜呈灰白色血管膜樣改變。角膜上皮愈合緩慢,熒光素染色面積大。新鮮羊膜移植組粘性分泌物較少,睫狀充血較輕,手術(shù)后5d，始出現(xiàn)新生血管芽，個別眼僅見血管輕度擴張，其后緩慢生長，7d可見新生血管管徑細，血管透明，14d新生血管侵入角膜緣約2.43±0.74mm
6、，30d新生血管侵入角膜緣內(nèi)約4.72±0.42mm。角膜上皮愈合較快，熒光素染色面積較堿燒傷組小。2.2光鏡觀察正常對照組：角膜上皮4～5層，排列規(guī)則，基質(zhì)層膠原纖維排列整齊，無新生血管浸潤。術(shù)后14d：堿燒傷組眼表面及角膜基質(zhì)中有大量的PMN浸潤，可見單層角膜上皮細胞覆蓋創(chuàng)面，但其排列疏松、紊亂，且形狀不規(guī)則，前彈力層不清；基質(zhì)層膠原纖維排列紊亂，粗細不均，纖維間出現(xiàn)明顯間隙，可見大量成熟新生血管,管腔擴大，管壁由單層平滑肌構(gòu)成，管腔內(nèi)有成熟紅細胞。新鮮羊膜移植組：角膜表面及基質(zhì)層內(nèi)少量PMN浸潤，上皮細胞增至2～3層；膠原排列相對整齊,已形成雙層的角膜
7、上皮，其排列較規(guī)則，角膜淺基質(zhì)層內(nèi)可見新生毛細血管，由單層內(nèi)皮細胞圍繞，管腔內(nèi)無紅細胞，且管徑較小，分布較稀疏。術(shù)后30d：堿燒傷組仍可見較多的PMN浸潤，上皮細胞雖已增至4～5層，但排列仍不規(guī)則，基質(zhì)層膠原纖維增生明顯，形成瘢痕；新鮮羊膜移植組角膜內(nèi)炎性細胞浸潤少，上皮排列較規(guī)則，膠原纖維排列整齊。2.3PMN計數(shù)在Q550CN計數(shù),每張切片從周邊到中央隨機取淺基質(zhì)層的5個視野（10000μm2），并取其均值進行統(tǒng)計分析（配對t檢驗）。結(jié)果顯示：14d，羊膜移植組較堿燒傷組有顯著性差異（P＝0.022）；30d，羊膜移植組較堿燒傷組有非常顯著差異（P＝0.
8、001，表1）。2.4透射電鏡結(jié)果2.4.1正常對照
