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1、二烯丙基二硫化物對(duì)HL作者：謝熠，范自力，姚晨姣，譚三勤，趙亞麗【摘要】為了研究二烯丙基二硫化物（diallyldisulfide，DADS）對(duì)白血病HL-60細(xì)胞株VEGFmRNA的表達(dá)及VEGF蛋白分泌的作用，并從影響VEGF生成的角度探討DADS的抗白血病機(jī)制，應(yīng)用ELISA法檢測(cè)藥物作用前后白血病HL-60細(xì)胞培養(yǎng)上清液中VEGF蛋白的含量；RT-PCR法檢測(cè)藥物作用前后白血病HL-60細(xì)胞VEGFmRNA的相對(duì)含量。結(jié)果表明：HL-60細(xì)胞中均有VEGFmRNA的表達(dá)和VEGF蛋白的分泌；與空白對(duì)照相比，DADS3個(gè)濃
2、度組（0.625，1.25，2.5μg/ml）作用HL-60細(xì)胞48小時(shí)和72小時(shí)均能下調(diào)HL-60細(xì)胞VEGFmRNA的表達(dá)及VEGF蛋白的分泌（P<0.01）。3個(gè)濃度組間差異顯著（P<0.01），其下調(diào)HL-60細(xì)胞VEGFmRNA的表達(dá)及VEGF蛋白的分泌效果與濃度相關(guān)（r>0.9，P<0.01）。結(jié)論：DADS可能通過抑制VEGFmRNA的表達(dá)及VEGF蛋白的分泌發(fā)揮抗白血病效應(yīng)。【關(guān)鍵詞】二烯丙基二硫化物 EffectofDiallylDisulfideonExpressionandSecr
3、etionofVEGFinHL-60LeukemicCells AbstractThestudyedtoinvestigatetheexpressionofVEGFmRNAandVEGFprotEininHL-60cellstreatedicmechanismofDADSinrespectofVEGFproduction.Semi-quantitativeRT-PCRandELISARNAandsecretionofVEGFprotEIninHL-60celllinestreatedbyDADSrespectively.The
4、resultsshoRNAandsecretionofVEGFproteinRNAandsecretionofVEGFproteininHL-60cellscouldbedoentLDADSfor48and72hoursandtheeffectshadadosedependentrelationship（r>0.9，P<0.01）.ThedifferencesbetongthreeDADS-treatedHL-60cellgroups（P<0.05）.ItisconcludedthatDADSeffective
5、lyinhibitstheproliferationofhumanleukemiacelllineHL-60cells;DADSexertsitsantileukemiceffectsbyreductionoftheexpressionofVEGFmRNAandVEGFproteinsecretion. Keyia;vascularendothelialgroa公司產(chǎn)品，相對(duì)分子質(zhì)量為300.44，純度≥98%。TRIZOL購自美國GibcoBRL公司；cDNA合成試劑盒、dNTP、TaqDNA聚合酶均購自晶美生物技術(shù)有限公司
6、，為美國Fermentas公司產(chǎn)品；電泳用瓊脂糖為德國Promega公司產(chǎn)品；RULERTMDNA100bpladder產(chǎn)品購自晶美公司；VEGFELISA試劑盒購自晶美生物公司。VEGF引物由上海博亞生物工程服務(wù)有限公司合成，引物序列參見 PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳部分結(jié)果 結(jié)果如圖1、2所示，HL-60細(xì)胞表達(dá)VEGFmRNA的3種片段，即516bp、588bp和648bp，分別是3種異構(gòu)體VEGF121、VEGF145、VEGF165mRNA的擴(kuò)增產(chǎn)物，HL-60細(xì)胞以VEGF121的表達(dá)最強(qiáng)。在同一時(shí)間點(diǎn)上隨作用藥物濃
7、度的升高，VEGF條帶與β-actin條帶豐度比值下降?！ ∮懻摗 EGF可以刺激新生血管的產(chǎn)生，通過自分泌和旁分泌途徑促進(jìn)自身的增殖，VEGF可能作為一種旁分泌因子影響著白血病細(xì)胞自身的生物學(xué)效應(yīng)［4］。大量的臨床研究證明，VEGF在各類型的白血病細(xì)胞中均有高表達(dá)，且是影響白血病發(fā)生發(fā)展及預(yù)后的獨(dú)立因素之一，尋找能抗VEGF產(chǎn)生的藥物在白血病的治療中就具有十分重要的意義。DADS是大蒜中一種有效的脂溶性成份，具有抑制白血病細(xì)胞生長、誘導(dǎo)白血病細(xì)胞分化、促進(jìn)白血病細(xì)胞凋亡作用。為進(jìn)一步探討DADS抑制白血病細(xì)胞增殖的機(jī)制，我們
8、用ELISA法檢測(cè)了不同濃度DADS作用48小時(shí)、72小時(shí)后白血病細(xì)胞培養(yǎng)液中VEGF的含量，用RT-PCR法檢測(cè)VEGFmRNA相對(duì)量的變化，從而從蛋白及轉(zhuǎn)錄水平上探討DADS對(duì)白血病細(xì)胞分泌VEGF及VEGFmRNA表達(dá)的影響。結(jié)果表明：經(jīng)DADS處理過的H
