資源描述：
《交泰丸對pcpa失眠大鼠大腦r》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、交泰丸對PCPA失眠大鼠大腦r【摘要】目的探討交泰丸鎮(zhèn)靜催眠的作用機理,為交泰丸進一步開發(fā)提供依據(jù)。方法選擇SD大鼠50只,隨機分為正常組,模型組，交泰丸低、中、高劑量組，安定組，采用對氯苯丙氨酸（PCPA）失眠模型，以高效液相檢測大腦r-氨基丁酸（GABA）含量變化,免疫組化法檢測r-氨基丁酸受體（GABARa1）。結(jié)果與模型組相比，交泰丸組可顯著增加下丘腦GABA含量及GABARa1受體表達。結(jié)論交泰丸可增加模型大鼠大腦r-氨基丁酸含量及受體表達，發(fā)揮鎮(zhèn)靜催眠作用，其作用靶點可能在GABARa1受體?！娟P(guān)鍵詞】交
2、泰丸；失眠模型；r-氨基丁酸；鎮(zhèn)靜催眠 交泰丸源自明·韓懋《韓氏醫(yī)通》，名見清·王士雄《四科簡要方》，由黃連、肉桂兩味藥物以特殊的配伍比例(10∶1)組成，具有交通心腎，鎮(zhèn)靜安神的功效，主要用于心腎不交引起的驚悸，夜寐不安等癥［1］。與傳統(tǒng)治療失眠的苯二氮卓類藥物相比，交泰丸的鎮(zhèn)靜催眠的作用機理可能有所區(qū)別，本研究以PCPA大鼠失眠模型為研究對象，觀察交泰丸對大鼠大腦中樞神經(jīng)遞質(zhì)γ-氨基丁酸(GABA)及GABARa1受體影響，以探求其鎮(zhèn)靜催眠作用機理?！ ?儀器與材料 1.1儀器DIONEXSummit高效液相色
3、譜儀（美國DIONEX公司），Chromeleon色譜工作站（美國DIONEX公司），HP1049A電化學(xué)檢測器（美國安捷倫公司），RC5C低溫高速離心機（美國杜邦公司），PHS-2C精密酸度計（上海理達儀器廠）。r-氨基丁酸標(biāo)準(zhǔn)品、3，4－二羥基芐胺（DHBA）(Sigma公司)?！ ?.2藥品黃連（生產(chǎn)批號：081120，廠家：廣州致信中藥飲片有限公司出品），肉桂（生產(chǎn)批號：080220，廠家：廣州致信中藥飲片有限公司出品），對氯苯丙胺酸（PCPA），為Sigma公司生產(chǎn)，r-氨基丁酸標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥檢所）、0.9
4、%NaCl注射液（生產(chǎn)批號：09123102，廠家：廣東艾希德藥業(yè)有限公司）?！ ?.3動物健康雄性SD大鼠50只，體質(zhì)量180～220g，從廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心購進，并在該動物中心進行飼養(yǎng)。每只大鼠均在相同條件下，自由飲水、攝食，保持自然光照?！ ?方法 2.1失眠大鼠模型的復(fù)制按照Imeri［2］方法,一次性腹腔注射PCPA300mg/kg。30h后，大鼠出現(xiàn)完全失眠狀態(tài)。此時分組給藥。 2.2分組按隨機原則，分為5組，每組10只。分組情況為A：正常對照組；B：模型組；C：交泰丸高劑量組（6g/kg）；
5、D：交泰丸中劑量組（4g/kg）；E：交泰丸低劑量組（2g/kg）；F：安定組（0.6mg/kg）?！ ?.3下丘腦中樞神經(jīng)遞質(zhì)r-氨基丁酸測定 2.3.1樣品制備大鼠斷頭處死后迅速取出大腦組織。大腦組織加入0．04mol／L高氯酸2．4ml，超聲勻漿，冰浴沉淀30min；4℃l0000g×15min離心，取上清，以0.75倍體積加入2mol／LKHCO3中和；3000g×5min離心，取上清溶液低溫保存?！ ?.3.2高效液相法色譜柱：DevelosilC30-UG-5（150mm×4.6mm,5μm，日本Nom
6、uraChemicalCo.,Ltd）；流動相：磷酸二氫鉀溶液（25mmol/L，內(nèi)含乙二胺四乙酸二鈉0.5mmol/L，用磷酸調(diào)pH3.4）∶乙腈=98∶2（體積比），用前經(jīng)0.45μm濾膜真空抽濾，流速1.5ml/min；玻璃碳工作電極，Ag/AgCl參比電極，檢測電位0.6V；柱溫30℃，自動進樣器溫度10℃。 2.4下丘腦GABA受體測定樣品制備：冰浴中迅速摘取大腦，固定液后固定5h(一般大于5h)后轉(zhuǎn)入20蔗糖(0．1mol／LPB，pH7．4)，4℃過夜至下沉，恒冷箱冷凍切片機作切片，厚30μm，留作免
7、疫組化法染色。石蠟切片常規(guī)脫蠟至水中，置0．01mol／L檸檬酸鹽緩沖液中微波修復(fù)10min，每張切片上滴加1g／LTriton溶液50μl，37℃孵育10min，PBS洗3min×3次，滴加封閉用動物血清，37℃孵育15min滴加GABARal兔抗(1∶3000)4℃孵育過夜，PBS洗5min×3次，滴加生物索標(biāo)記山羊抗兔IgG，37℃孵育20min，PBS洗3min×3次，滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，37℃孵育20min，PBS洗3min×3次，然后DAB顯色，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。 各組
8、每只大鼠均選取免疫染色切片兩張，經(jīng)HPIAS-1000型高清晰度彩色病理圖文報告分析系統(tǒng)對陽性反應(yīng)區(qū)進行掃描。分別測定每張切片陽性反應(yīng)產(chǎn)物的平均光密度值(OD)值，對所有數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計學(xué)分析軟件SPSS13．0進行t檢驗?！ ?結(jié)果 見表1。表1各組大鼠大腦下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)的含量變化比較（略） 與正常組相比，模型組下丘腦GABA含量及GABAR
