非小細胞肺癌組織survivin和caspase

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1、非小細胞肺癌組織Survivin和Caspase【摘要】目的探討Survivin和Caspase3基因在非小細胞肺癌（NSCLC）中的表達及其相互關系。方法應用免疫組織化學等技術與方法檢測74例NSCLC組織細胞中Survivin和Caspase3基因的表達。結(jié)果在NSCLC組織細胞中，Survivin基因表達率為64.9%(48/74),其表達與NSCLCTNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和細胞分化程度密切相關（χ2=5.00～5.20，P<0.05）；Caspase3基因表達率為55.4%(41/74),其表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關（χ2=5.98，P<0.05）；在N

2、SCLC組織細胞中，Survivin基因表達與Caspase3基因表達呈高度負相關(r=-0.404，P<0.01)。結(jié)論在NSCLC組織細胞中，Survivin基因表達上調(diào)，Caspase3基因失活或低表達；Survivin結(jié)合激活的Caspase3，抑制其活性，阻止細胞凋亡；Survivin基因表達預示肺癌組織有較高的侵襲性和預后不良?！娟P鍵詞】基因Survivin基因Caspase3癌非小細胞肺免疫組織化學　　［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheexpressionsofSurvivinandCaspase3geneand

3、theirrelationshipinnonsmallcelllungcancer(NSCLC).MethodsTheexpressionsofSurvivingeneandcaspase3genein74paraffinembeddedNSCLCsamplesmunohistochemically.ResultsSurvivinphnodeinvolvement,andcelldifferentiation(χ2=5.00-5.20,P<0.05).Caspase3phnodeinvolvement.TheexpressionofSurvivina,nonsm

4、allcelllung;Immunohistochemistry肺癌是最常見的原發(fā)惡性腫瘤，是一種嚴重威脅人類健康的常見病。有研究認為,Caspase3基因的低表達有助于腫瘤的發(fā)生。Survivin作為新近發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白，在絕大多數(shù)人類腫瘤細胞中都有高表達[1]，可通過抑制Caspase3的凋亡作用而致癌。本研究采用免疫組化等技術與方法研究非小細胞肺癌（NSCLC）組織細胞中Survivin和Caspase3基因的表達及其相互關系，探討Survivin和Caspase3在肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用?，F(xiàn)將結(jié)果報告如下?！　?材料與方法　　1.1標本我院胸外科手術切除的NS

5、CLC組織標本74例，其中男54例，女20例；年齡31～76歲，平均56.1歲。所有病人術前均未接受過化療和放療。經(jīng)病理學檢查證實為肺癌，其中鱗癌42例，腺癌32例；低分化30例，中分化和高分化癌44例。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟1997年修訂的肺癌分期標準：Ⅰ期＋Ⅱ期40例，Ⅲ期＋Ⅳ期34例；伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者52例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者22例。　　1.2主要實驗試劑Survivin多克隆抗體購于北京中山生物技術有限公司，Caspase3多克隆抗體購于北京博菲康生物技術有限公司，多聚賴氨酸玻片處理劑購于武漢亞法生物有限公司?！　?.3方法石蠟標本制成3μm厚的切片。常規(guī)脫蠟，梯度乙醇脫水，微

6、波抗原修復，內(nèi)源性過氧化物酶阻斷15min，分別滴加Survivin多克隆抗體(1∶125)和Caspase3的多克隆抗體(1∶100)，置27℃孵育60min，Ⅱ抗37℃孵育30min，Ⅲ抗37℃孵育30min，DAB顯色4～8min，蘇木精復染后，脫水、透明、封固后光鏡下觀察。用已知的陽性切片染色作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照?！　?.4免疫組化陽性細胞的觀察和圖像分析采用半定量方法測定Caspase3、Survivin基因表達[2]。選取5個高倍鏡視野(200倍)計數(shù)1000個腫瘤細胞中Caspase3、Survivin表達陽性細胞數(shù)，分為以下4個等級:

7、0級≤5%，5%<1級≤25%，26%<2級<60%，3級>60%。根據(jù)Caspase3、Survivin免疫組化染色的強度分成以下3個等級：弱陽性(顯色淡黃或僅個別細胞呈黃至棕黃色染色)=1；中等陽性(顯色強度介于弱陽性與強陽性之間)=2；強陽性(多數(shù)細胞呈棕黃至棕褐色染色)=3；以陽性細胞數(shù)分值與染色強度分值的乘積為每一例的積分，積分0～1分為表達陰性(-)，2～3分為表達弱陽性(+)，4～6分為表達中度陽性()，>6分為表達強陽性()。弱陽性歸為陰性