環(huán)氧化酶2抑制劑聯(lián)合依托泊苷對肺癌細胞增殖凋亡的影響

《環(huán)氧化酶2抑制劑聯(lián)合依托泊苷對肺癌細胞增殖凋亡的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在工程資料-天天文庫。

1、環(huán)氧化酶2抑制劑聯(lián)合依托泊苷對肺癌細胞增殖凋亡的影響作者：邢麗華,劉劍波　張惠蘭，張珍祥【摘要】目的探討環(huán)氧化酶2(COX2)抑制劑尼米舒利(NIM)與化療藥依托泊苷(VP16)聯(lián)用對肺癌細胞增殖和凋亡的影響。方法培養(yǎng)人肺癌細胞A549：①NIM（25μmol/L）與VP16（2～32μg/mL）聯(lián)合，MTT試驗觀察干預48h后細胞增殖變化及增殖抑制率；②分為對照組、NIM組（25μmol/L）、VP16組（8μg/mL）和NIM+VP16組，觀察12h、24h及48h后A549細胞生長情況，

2、描記生長曲線；流式細胞術檢測干預48h后細胞凋亡率。結果①VP16能抑制肺癌A549細胞的增殖，且呈量效關系（r=-0.908,P<0.01），NIM與VP16聯(lián)用后，抑增殖作用增強，二者有相加或協(xié)同作用；②NIM及VP16均可抑制A549細胞的生長，誘導凋亡，二者聯(lián)用后作用增強。結論NIM與VP16聯(lián)用可增強對肺癌細胞增殖的抑制和凋亡的誘導，二者具有協(xié)同抗腫瘤作用?！娟P鍵詞】肺癌；凋亡；增殖；環(huán)氧化酶2；依托泊苷TheEffectsofNimesulidebined;Apoptosis;

3、Proliferation;Cyclooxygenase2;Etoposide近20年來，肺癌已成為世界范圍內發(fā)病率及病死率最高的惡性腫瘤，嚴重威脅著人類的健康和生命。目前由于早期診斷技術的局限，約75%～80%患者就診時已屬晚期，有效的綜合治療尤其是提高全身化療療效十分必要。環(huán)氧化酶2（cyclooxygenase2，COX2）是前列腺素（prostaglandins，PGs）生物合成過程中一個重要的限速酶，與腫瘤發(fā)生發(fā)展關系密切，而COX2抑制劑可增強一些腫瘤細胞對化療藥物的敏感性[1]。本研究擬

4、探討COX2抑制劑尼米舒利(nimesulide,NIM)與肺癌常用化療藥依托泊苷（etoposide,VP16）聯(lián)用對肺癌細胞增殖與凋亡的作用，以期為肺癌的臨床治療提供基礎理論依據(jù)。1材料與方法1.1細胞培養(yǎng)人肺癌細胞株A549（購自武漢大學典型生物冷藏中心），用含10%新生牛血清（武漢三利生物制品廠）、100u/mL青霉素及100u/mL鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基（Gibco公司），于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內培養(yǎng)，細胞為貼壁生長，0.25%胰蛋白酶（Gibco公司）消化傳代。1.2MTT比色

5、法檢測A549細胞增殖及增殖抑制率取對數(shù)生長期A549細胞按1×104/孔接種于96孔培養(yǎng)板，每孔加液量200μL。24h后換液，設空白調零組：不接種細胞；對照組：只含等量溶劑；實驗組：NIM（Sigma公司）25μmol/L與VP16（山東齊魯制藥廠）2～32μg/mL聯(lián)用，每組設6個復孔。培養(yǎng)48h后加入MTT（5mg/mL）20μL,繼續(xù)培養(yǎng)4h后吸出培養(yǎng)液，每孔加DMSO150μL，振蕩溶解10min，待結晶完全溶解后，在ELX800酶標儀（美國BioTek公司）上選擇波長490nm，空白組調零

6、，測定各孔吸光度A，計算細胞生長抑制率。抑制率＝（1－實驗組A平均值/對照組A平均值）×100%。按以下公式計算Q值并判斷兩藥的聯(lián)合效應［2］：Q=E(A+B)/[EA+(1EA)EB]，其中E(A+B)為兩藥合用的抑制率，EA、EB為兩藥單用的抑制率。Q=0.85～1.15表示兩藥作用相加；Q>1.15表示兩藥作用協(xié)同；Q<0.85表示兩藥作用相互拮抗。1.3描繪細胞生長曲線取對數(shù)生長期A549細胞按2×105/mL接種于六孔板，24h后換液，分為4組，即對照組：未加藥物；NIM組：NIM2

7、5μmol/L；VP16組：VP168μg/mL；NIM+VP16組：NIM25μmol/L+VP168μg/mL。分別于干預后12h、24h、48h各取4孔，每孔4次記數(shù)，取其平均值，描繪生長曲線。1.4流式細胞術檢測細胞凋亡率取對數(shù)生長期A549細胞2×105/mL接種于培養(yǎng)瓶中，24h后換液，分組同1.3，各組均重復3瓶。培養(yǎng)48h后常規(guī)收集細胞，70%冷乙醇固定，-20℃保存。檢測前PBS洗兩次，RNA酶消化，PI避光染色30min，上流式細胞儀檢測凋亡率。1.5統(tǒng)計學處理計量資料用±s表示

8、，SPSS11.0統(tǒng)計軟件行單因素方差分析。2結果2.1細胞增殖抑制率MTT比色法檢測A值結果顯示，見表1。VP16單用時，即可抑制A549細胞的增殖（P均<0.01），隨著濃度VP16的增加，抑制作用增大，呈量效關系（r=-0.908,P<0.01）；NIM與VP16聯(lián)用后，抑制作用增大，抑制率增加。我們的前期研究結果已證實，NIM濃度為25μmol/L時，其對A549細胞增殖的抑制率為10