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1、蔬菜中敵百蟲、丙溴磷、滅多威、克百威、敵敵畏殘留的快速檢測（KJ201710）1 范圍本方法規(guī)定了蔬菜中敵百蟲、丙溴磷、滅多威、克百威、敵敵畏殘留的快速檢測方法。本方法適用于油菜、菠菜、芹菜、韭菜等蔬菜中敵百蟲、丙溴磷、滅多威、克百威、敵敵畏殘留的快速測定。酶抑制（率）法（分光光度法）2 原理在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物（乙酰膽堿）水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計在412nm處測定吸光度隨時間的變化值，計算出抑制率。3 試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所
2、用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級水。3.1 試劑3.1.1 丙酮（CH3COCH3）。3.1.2 磷酸氫二鉀（K2HPO4）。3.1.3 磷酸二氫鉀（KH2PO4）。3.1.4 5,5-二硫代雙（2-硝基苯甲酸）（C14H8N2O8S2）。3.1.5 碳酸氫鈉（NaHCO3）。3.1.6 碘化乙酰硫代膽堿（?C7H16INOS）。3.1.7 pH8.0緩沖溶液：分別稱取11.9g無水磷酸氫二鉀及3.2g磷酸二氫鉀，溶解于1000mL水中，混勻。3.1.8 顯色劑：分別取160mg5,5-二硫代雙（2-硝基苯甲酸）（DTNB）和15.6mg碳酸氫鈉，用20mL緩沖
3、溶液溶解，4℃冰箱中保存。3.1.9 底物：取125mg碘化乙酰硫代膽堿，加15mL蒸餾水溶解，搖勻后置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。保存期不超過兩周。3.1.10 乙酰膽堿酯酶：4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?.2 參考物質(zhì)—8——3種有機(jī)磷和2種氨基甲酸酯類農(nóng)藥參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量見表1，純度均≥98%。表1有機(jī)磷和氨基甲酸酯類參考物質(zhì)中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量序號中文名稱英文名稱CAS登錄號分子式相對分子質(zhì)量1克百威Carbofuran1563-66-2C12H15NO3221.252滅多威Methomyl59669-
4、26-0C5H10N2O2S162.233丙溴磷profenofos?41198-08-7C11H15BrClO3PS373.634敵敵畏Dichlorvos62-73-7C4H7Cl2O4P220.985敵百蟲Dipterex52-68-6?C4H8Cl3O4P257.441.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制1.1.1 克百威、滅多威、敵敵畏、敵百蟲標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1000μg/mL）：冷藏、避光、干燥條件下保存。1.1.2 丙溴磷標(biāo)準(zhǔn)儲備液（100μg/mL）：冷藏、避光、干燥條件下保存。1.1.3 克百威、滅多威、敵敵畏、敵百蟲標(biāo)準(zhǔn)中間液A（100μg/mL）：精密移取上述標(biāo)準(zhǔn)儲備液（10
5、00μg/mL）（3.3.1）各1mL，分別置于10mL容量瓶中，用丙酮（3.1.1）稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為100?μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液A。1.1.4 克百威、滅多威、敵敵畏、敵百蟲、丙溴磷標(biāo)準(zhǔn)中間液B（1μg/mL）：精密移取標(biāo)準(zhǔn)中間液A（100μg/mL）（3.3.3）及丙溴磷標(biāo)準(zhǔn)儲備液（100μg/mL）（3.3.2）各1mL，分別置于100mL容量瓶中，用緩沖溶液（3.1.7）稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1?μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間液B。2 儀器和設(shè)備2.1 恒溫水浴鍋。2.2 天平：感量為0.1g。2.3 分光光度計或相應(yīng)商品化測定儀。2.4 環(huán)境條件：溫度15℃～3
6、5℃，濕度≤80%。3 分析步驟3.1 試樣的提取3.1.1 整株提取法選取韭菜、芹菜有代表性的樣品，擦去表面泥土，稱取試樣3g（精確至0.1g）置于表面皿中，加入10mL緩沖液（3.1.7），殘缺面不得接觸緩沖液，輕輕振搖50次，靜置2min以上，取上清液備用。—8——1.1.1 整體測定法選取油菜、菠菜有代表性的樣品，擦去表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，稱取3g（精確至0.1g）放入離心管中，加入10mL緩沖溶液（3.1.7），振搖50次，靜置2min以上，倒出提取液，靜置3min～5min，待用。1.2 測定步驟1.2.1 對照液的測定先于反應(yīng)管中加入3mL緩沖溶液（3
7、.1.7），再加入適量酶液、0.1mL顯色劑，搖勻后于37℃水浴鍋中放置15min。加入0.1mL底物搖勻，立即測定吸光度，3min后再測定一次，記錄反應(yīng)3min的吸光度值的變化?A0。1.2.2 樣品液的測定先于反應(yīng)管中加入3mL提取液，其他操作與對照液操作（5.2.1）相同，記錄反應(yīng)3min的吸光度值的變化?At。1.3 質(zhì)控試驗每次測定應(yīng)同時進(jìn)行空白試驗和加標(biāo)質(zhì)控試驗。1.3.1 空白試驗稱取空白試樣，按照5.1和5.2步驟與樣品同法操作。1.3.2 加標(biāo)質(zhì)控試驗1.3.2.1 韭菜、
