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1、蔬菜中敵百蟲、丙溴磷、滅多威、克百威、敵敵畏殘留的快速檢測(KJ201710)1 范圍本方法規(guī)定了蔬菜中敵百蟲、丙溴磷、滅多威、克百威、敵敵畏殘留的快速檢測方法。本方法適用于油菜、菠菜、芹菜、韭菜等蔬菜中敵百蟲、丙溴磷、滅多威、克百威、敵敵畏殘留的快速測定。酶抑制(率)法(分光光度法)2 原理在一定條件下,有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶正常功能有抑制作用,其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常情況下,酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物(乙酰膽堿)水解,其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng),產(chǎn)生黃色物質(zhì),用分光光度計在412nm處測定吸光度隨時間的變化值,計算出抑制率。3 試劑和材料除另有規(guī)定外,本方法所
2、用試劑均為分析純,水為GB/T6682規(guī)定的二級水。3.1 試劑3.1.1 丙酮(CH3COCH3)。3.1.2 磷酸氫二鉀(K2HPO4)。3.1.3 磷酸二氫鉀(KH2PO4)。3.1.4 5,5-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)(C14H8N2O8S2)。3.1.5 碳酸氫鈉(NaHCO3)。3.1.6 碘化乙酰硫代膽堿(?C7H16INOS)。3.1.7 pH8.0緩沖溶液:分別稱取11.9g無水磷酸氫二鉀及3.2g磷酸二氫鉀,溶解于1000mL水中,混勻。3.1.8 顯色劑:分別取160mg5,5-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)(DTNB)和15.6mg碳酸氫鈉,用20mL緩沖
3、溶液溶解,4℃冰箱中保存。3.1.9 底物:取125mg碘化乙酰硫代膽堿,加15mL蒸餾水溶解,搖勻后置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。保存期不超過兩周。3.1.10 乙酰膽堿酯酶:4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?.2 參考物質(zhì)—8——3種有機(jī)磷和2種氨基甲酸酯類農(nóng)藥參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量見表1,純度均≥98%。表1有機(jī)磷和氨基甲酸酯類參考物質(zhì)中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量序號中文名稱英文名稱CAS登錄號分子式相對分子質(zhì)量1克百威Carbofuran1563-66-2C12H15NO3221.252滅多威Methomyl59669-
4、26-0C5H10N2O2S162.233丙溴磷profenofos?41198-08-7C11H15BrClO3PS373.634敵敵畏Dichlorvos62-73-7C4H7Cl2O4P220.985敵百蟲Dipterex52-68-6?C4H8Cl3O4P257.441.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制1.1.1 克百威、滅多威、敵敵畏、敵百蟲標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1000μg/mL):冷藏、避光、干燥條件下保存。1.1.2 丙溴磷標(biāo)準(zhǔn)儲備液(100μg/mL):冷藏、避光、干燥條件下保存。1.1.3 克百威、滅多威、敵敵畏、敵百蟲標(biāo)準(zhǔn)中間液A(100μg/mL):精密移取上述標(biāo)準(zhǔn)儲備液(10
5、00μg/mL)(3.3.1)各1mL,分別置于10mL容量瓶中,用丙酮(3.1.1)稀釋至刻度,搖勻,制成濃度為100?μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液A。1.1.4 克百威、滅多威、敵敵畏、敵百蟲、丙溴磷標(biāo)準(zhǔn)中間液B(1μg/mL):精密移取標(biāo)準(zhǔn)中間液A(100μg/mL)(3.3.3)及丙溴磷標(biāo)準(zhǔn)儲備液(100μg/mL)(3.3.2)各1mL,分別置于100mL容量瓶中,用緩沖溶液(3.1.7)稀釋至刻度,搖勻,制成濃度為1?μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間液B。2 儀器和設(shè)備2.1 恒溫水浴鍋。2.2 天平:感量為0.1g。2.3 分光光度計或相應(yīng)商品化測定儀。2.4 環(huán)境條件:溫度15℃~3
6、5℃,濕度≤80%。3 分析步驟3.1 試樣的提取3.1.1 整株提取法選取韭菜、芹菜有代表性的樣品,擦去表面泥土,稱取試樣3g(精確至0.1g)置于表面皿中,加入10mL緩沖液(3.1.7),殘缺面不得接觸緩沖液,輕輕振搖50次,靜置2min以上,取上清液備用。—8——1.1.1 整體測定法選取油菜、菠菜有代表性的樣品,擦去表面泥土,剪成1cm左右見方碎片,稱取3g(精確至0.1g)放入離心管中,加入10mL緩沖溶液(3.1.7),振搖50次,靜置2min以上,倒出提取液,靜置3min~5min,待用。1.2 測定步驟1.2.1 對照液的測定先于反應(yīng)管中加入3mL緩沖溶液(3
7、.1.7),再加入適量酶液、0.1mL顯色劑,搖勻后于37℃水浴鍋中放置15min。加入0.1mL底物搖勻,立即測定吸光度,3min后再測定一次,記錄反應(yīng)3min的吸光度值的變化?A0。1.2.2 樣品液的測定先于反應(yīng)管中加入3mL提取液,其他操作與對照液操作(5.2.1)相同,記錄反應(yīng)3min的吸光度值的變化?At。1.3 質(zhì)控試驗每次測定應(yīng)同時進(jìn)行空白試驗和加標(biāo)質(zhì)控試驗。1.3.1 空白試驗稱取空白試樣,按照5.1和5.2步驟與樣品同法操作。1.3.2 加標(biāo)質(zhì)控試驗1.3.2.1 韭菜、