06血清總膽紅素與直接膽紅素測(cè)定

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1、標(biāo)題：血清總膽紅素和直接膽紅素測(cè)定版本號(hào)：A修訂號(hào)：0文件編號(hào)CJYYLAB-SH-SOP-006發(fā)布日期：2006年06月06日生效日期：2006年07月01日發(fā)布部門：管理層編制人：何順卿審核人：鐘尊勇批準(zhǔn)人：張范頁(yè)碼：共3頁(yè)一、目的膽紅素是血紅蛋白的代謝產(chǎn)物，來(lái)源有三：（1）人體內(nèi)膽紅素的3/4源于循環(huán)血液中衰老紅細(xì)胞崩解后所釋放出的血紅蛋白輔基血紅素降解而產(chǎn)生；（2）骨髓中的紅細(xì)胞原位溶血所釋放的血紅蛋白；（3）含卟啉的血色蛋白如肌紅蛋白和其他非血紅蛋白性的正鐵血紅素分解后產(chǎn)生極少量膽紅素。血紅蛋白被單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)破壞后分解成膽綠素，再還原成膽紅素進(jìn)入血與血漿白蛋白結(jié)合而被

2、運(yùn)轉(zhuǎn)，稱為非結(jié)合膽紅素或間接膽紅素；間接膽紅素難溶于水，不能由腎臟排出而進(jìn)入肝臟，受肝內(nèi)葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶的作用與葡萄糖醛酸結(jié)合，形成葡萄糖醛酸酯，稱為結(jié)合膽紅素或直接膽紅素。結(jié)合膽紅素由肝隨膽汁排至腸道，被還原成糞膽原（尿膽原）再經(jīng)氧化變成糞膽素（尿膽素），大部分隨糞便排出體外；小部分經(jīng)門脈吸收回肝，復(fù)經(jīng)肝腸循環(huán)，其中一小部分進(jìn)入血循環(huán)，經(jīng)腎排出，稱尿膽原。當(dāng)肝細(xì)胞損傷，膽管阻塞，紅細(xì)胞破壞增加或壽命縮短時(shí)，膽紅素代謝發(fā)生異常，臨床上即出現(xiàn)黃疸。二、測(cè)定方法改良J-G法三、原理3血清與醋酸鈉-咖啡因-苯甲酸鈉試劑混合后，加入偶氮苯磺酸，生成紫色的偶氮膽紅素。其中醋酸緩沖液用以保持偶氮

3、反應(yīng)的PH，咖啡因、苯甲酸鈉加速偶氮苯磺酸的偶聯(lián)反應(yīng)?？箟难崞茐氖Ｓ嗯嫉噭K止偶氮反應(yīng)。最后加入強(qiáng)堿性酒石酸溶液使紫色偶氮膽紅素變成藍(lán)色偶氮膽紅素，在600nm波長(zhǎng)下比色,測(cè)定藍(lán)色偶氮膽紅素的生成量。四、標(biāo)本1、靜脈抽取病人空腹血，置于潔凈干燥試管或含促凝劑的真空管內(nèi)。2、采血后應(yīng)立即送到檢驗(yàn)科生化室。3、樣品收到后立即分離血清，不能及時(shí)測(cè)定的血清應(yīng)于2—8℃保存。4、溶血或脂血的標(biāo)本不能測(cè)定。五、設(shè)備及試劑1、希邁全自動(dòng)生化儀。2、上海復(fù)星長(zhǎng)征公司膽紅素試劑。3、膽紅素試劑應(yīng)于2—8℃冰箱保存。六、操作步驟1、樣本的準(zhǔn)備：將編好號(hào)的樣品離心，取血清加入樣品杯放到樣品盤的規(guī)定位置

4、，再把樣品盤放到儀器中相應(yīng)位置。2、試劑的檢查：每天測(cè)定前先檢查各種試劑的數(shù)量、效期、定標(biāo)等情況，確認(rèn)無(wú)誤后方可進(jìn)行測(cè)定。3、操作方法：詳見(jiàn)希邁生化儀操作手冊(cè)。七、質(zhì)量控制每天操作過(guò)程中應(yīng)使用上海復(fù)星長(zhǎng)征公司的生化質(zhì)控血清至少做一次室內(nèi)質(zhì)控，每年定期參加海南省臨檢中心所組織的室間質(zhì)評(píng)。八、干擾因素1、輕度溶血對(duì)本法無(wú)影響，但嚴(yán)重溶血時(shí)可使測(cè)定結(jié)果偏低，其原因是血紅蛋白與重氮試劑反應(yīng)形成的產(chǎn)物可破壞偶氮膽紅素，還可被亞硝酸氧化為高鐵血紅蛋白而干擾測(cè)定。2、膽紅素對(duì)光敏感，標(biāo)本應(yīng)盡量避光，盡早測(cè)定。31、脂血對(duì)測(cè)定有干擾，盡量抽取空腹血。2、膽紅素結(jié)果過(guò)高時(shí)，可用生理鹽水稀釋后測(cè)定。九、參

5、考區(qū)間總膽紅素：1.7—17.1umol/l直接膽紅素：0—6umol/l間接膽紅素=總膽紅素-直接膽紅素十、實(shí)驗(yàn)室解釋血清膽紅素的測(cè)定能準(zhǔn)確地反映黃疸的程度，對(duì)臨床診斷隱性黃疸及黃疸有重要意義。1、肝細(xì)胞疾病如急性黃疸性肝炎、慢活肝、肝硬化、肝壞死等，膽紅素會(huì)有升高現(xiàn)象。2、阻塞性疾病如膽石癥、肝癌、胰頭癌等壓迫造成的膽道阻塞性疾患，可使血清總膽紅素和直接膽紅素均升高。3、新生兒黃疸、敗血癥、溶血性貧血、惡性瘧疾、嚴(yán)重大面積燒傷或因輸血不當(dāng)引起溶血等可引起總膽紅素、間接膽紅素升高。十一、異常結(jié)果處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)與臨床相符，不符的應(yīng)復(fù)查。十二、參考文獻(xiàn)1、葉應(yīng)嫵、王毓三主編，全國(guó)臨床檢驗(yàn)

6、操作規(guī)程，中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司、南京、第二版、1997。2、管正大主編，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床意義手冊(cè)，人民軍醫(yī)出版社，北京、第一版、1994。3、王淑娟、周惠平、夏鐵安主編，現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)手冊(cè)，北京醫(yī)科大學(xué)、協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，北京、第一版、1995。3